Dépannage - Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi

• Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l'élimination des composés potentiellement toxiques.
• Éviter une contamination microbienne des échantillons qui peut entraîner un marquage non spécifique.
• Des durées ou températures de révélation ou d'incubation autres que celles spécifiées peuvent donner des résultats erronés. Tout
changement doit être validé par l'utilisateur.
Mode D'emploi
RNA Negative Control Probe a été développé pour être utilisé sur le système BOND automatisé (qui comprend les systèmes Leica
BOND-MAX et Leica BOND-III) en association avec Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection et les réactifs auxiliaires
BOND. Le protocole de coloration recommandé pour RNA Negative Control Probe est ISH Protocol A. Un prétraitement enzymatique est
recommandé avec BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, pendant 15 minutes.
Des contrôles appropriés de tissu et de réactif doivent toujours être employés. Le protocole relatif au tissu et aux contrôles de réactif doit
correspondre à celui de la sonde d'essai d'ARN.
Contrôle de qualité
Des différences de traitement des tissus et de procédures techniques dans le laboratoire de l'utilisateur sont susceptibles de conduire
à une variabilité significative des résultats, ce qui rend nécessaire la mise en œuvre régulière de contrôles en interne, en plus des
procédures suivantes.
Contrôle positif du tissu
Il est utilisé pour indiquer que les tissus ont été préparés correctement et que les techniques de marquage sont appropriées. Un contrôle
positif du tissu doit être inclus pour chaque série de conditions d'essais et pour chaque essai de marquage. Un tissu présentant un
marquage faiblement positif est plus adapté à un contrôle optimal de qualité qu'un tissu présentant un marquage fortement positif, il
permet également de détecter des niveaux moindres de dégradation du réactif.
Contrôle négatif du tissu
Il doit être examiné après le contrôle positif du tissu afin de vérifier la spécificité du marquage de la sonde vers le site cible. La diversité
des différents types cellulaires présents dans la plupart des coupes tissulaires permet fréquemment de disposer de sites de contrôle
négatif, mais cette possibilité doit être vérifiée par l'utilisateur.
Contrôle négatif du réactif
Utiliser RNA Negative Control Probe PB0809 à la place de la sonde d'essai d'ARN avec une coupe de chaque échantillon du patient afin
d'évaluer le marquage non spécifique et de permettre une meilleure interprétation du marquage spécifique au niveau du site cible.
Contrôle positif du réactif
Utiliser RNA Positive Control Probe PB0785 à la place de la sonde d'essai d'ARN avec une coupe de chaque échantillon du patient afin
d'obtenir des informations sur la préservation des acides nucléiques dans le tissu ainsi que la pénétrabilité des acides nucléiques vis-à-
vis de la sonde. Si RNA Positive Control Probe ne présente pas de marquage positif, les résultats des échantillons d'essai doivent être
considérés comme invalides.
Tissu du patient
Examiner les échantillons du patient marqués avec la sonde d'essai d'ARN en dernier. L'intensité du marquage positif ne doit être
évaluée que par rapport au marquage non spécifique obtenu avec RNA Negative Control Probe PB0809.
Résultats Attendus
Tissus sains
À l'aide de PB0809, aucune coloration n'a été observée dans un large éventail de tissus. (Nombre total de cas normaux évalués = 96).
Tissus tumoraux
À l'aide de PB0809, aucune coloration n'a été observée dans les tumeurs ovariennes (0/3), tumeurs de la thyroïde (0/3), tumeurs
pulmonaires (0/3), tumeurs du foie (0/3), tumeurs du cerveau (0/2), tumeurs de l'œsophage (0/2), tumeurs mammaires (0/2), tumeurs
de la peau (0/2), tumeurs métastatiques d'origine inconnue (0/2), tumeurs de l'estomac (0/1), tumeurs du côlon (0/1), tumeurs rectales
(0/1), une tumeur du larynx (0/1) et une tumeur du thymus (0/1) (Nombre total de cas anormaux évalués = 29).
PB0809 est recommandé pour aider en tant qu'outil de dépistage afin d'évaluer la coloration d'une sonde d'essai d'ARN sur le
spécimen d'un patient.
Limites Spécifiques du Produit
RNA Negative Control Probe a été optimisée chez Leica Biosystems pour une utilisation avec Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer
Refine Detection et les réactifs auxiliaires BOND. Les utilisateurs qui ne respectent pas les procédures de test recommandées prennent
la responsabilité de l'interprétation des résultats des patients dans ces conditions. Les durées du protocole doivent être déterminées
empiriquement, à cause des variations de fixation des tissus et de l'efficacité de la digestion enzymatique. RNA Negative Control Probe
devrait être réalisés lors de l'optimisation des conditions de révélation et des durées du protocole.
Dépannage
La référence 3 peut faciliter les mesures correctrices.
Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.
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