Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 40

• A mintákat fixálás előtt és után, valamint a velük érintkező összes anyagot fertőzések terjesztésére képes anyagként kell kezelni, és
megfelelő körültekintéssel kell ártalmatlanítani
érintkezését a reagensekkel és a mintákkal. Ha a reagensek vagy minták érzékeny területtel érintkeznek, bő vízzel mossa le az
érintett területet. Forduljon orvoshoz.
• Minden potenciálisan toxikus összetevő ártalmatlanításával kapcsolatban kövesse a szövetségi, állami és helyi előírásokat.
• Minimálisra kell csökkenteni a reagensek mikrobiális szennyeződését, különben megnövekedhet a nem specifikus festődés.
• A megadottaktól eltérő feltárási körülmények, inkubációs idők és hőmérsékletek hibás eredményekhez vezethetnek. A felhasználónak
minden ilyen jellegű változtatást validálnia kell.
Használati útmutató
Az RNA Negative Control Probe automata BOND rendszerrel (így a Leica BOND-MAX rendszerrel vagy a Leica BOND-III rendszerrel)
és az Anti-Fluorescein Antibody antitesttel, a BOND Polymer Refine Detection kittel és a BOND segédreagensekkel való együttes
használatra lett kifejlesztve. Az RNA Negative Control Probe próbához javasolt festési protokoll az ISH Protocol A. Az enzimes
feltáráshoz a BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 oldat 15 percig tartó alkalmazása javasolt.
Mindig kell megfelelő szövet- és reagenskontrollokat alkalmazni. A szövet- és reagenskontrollokhoz tartozó protokollnak meg kell felelnie
az RNS vizsgálati próba protokolljának.
Minőség-ellenőrzés
A felhasználó laboratóriumában alkalmazott szövetfeldolgozási és technikai eljárások eltérései jelentős különbséget okozhatnak az
eredményekben, ami az alábbi eljárásokon túl belső kontrollok rendszeres futtatását teszi szükségessé.
Pozitív szövetkontroll
A megfelelő szövet-előkészítés és festési technikák ellenőrzésére használatos. Minden tesztelési körülményegyüttes esetében és
minden megfestési sorozatban kell alkalmazni egy pozitív szövetkontrollt.
A gyengén pozitív festődésű szövet alkalmasabb az erősebben pozitív festődésű szövetnél az optimális minőség-ellenőrzéshez,
valamint a kismértékű reagensbomlás észleléséhez.
Negatív szövetkontroll
A pozitív szövetkontroll után azért kell megvizsgálni, hogy a próba célnak megfelelő jelölésének specificitását ellenőrizni lehessen.
Ezenkívül a legtöbb szövetmetszetben jelen lévő különböző sejttípusok gyakran használhatók negatív kontrollként, de ezeket a
felhasználónak kell ellenőriznie.
Negatív reagenskontroll
A nem specifikus festődés kiértékeléséhez és a célsejtekben létrejövő specifikus festődés jobb értelmezéséhez az RNS vizsgálati próba
helyett alkalmazza az RNA Negative Control Probe PB0809 készítményt minden betegminta esetén egy metszetnél.
Pozitív reagenskontroll
A nukleinsavak szöveti megtartottságával, valamint a nukleinsavak próba általi hozzáférhetőségével kapcsolatos információk
szerzéséhez az RNS vizsgálati próba helyett alkalmazza az RNA Positive Control Probe PB0785 készítményt minden betegminta esetén
egy metszetnél. Ha az RNA Positive Control Probe nem mutat pozitív festődést, a vizsgált minták eredményeit érvénytelennek kell
tekinteni.
Betegszövet
Az RNS vizsgálati próbával festett betegmintákat vizsgálja meg utolsóként. A pozitív festődés intenzitását az RNA Negative Control
Probe PB0809 esetleges nem specifikus háttérfestődésének viszonylatában értékelje.
Várható eredmények
Normál szövetek
A PB0809 alkalmazásával számos különböző szöveten nem volt festődés megfigyelhető. (Vizsgált normál esetek összesített száma =
96).
Kóros szövetek
A PB0809 használatakor nem volt megfigyelhető festődés petefészek-daganatok (0/3), pajzsmirigy-daganatok (0/3), tüdődaganatok (0/3)
májdaganatok (0/3), agydaganatok (0/2), nyelőcső-daganatok (0/2), emlődaganatok (0/2), bőrdaganatok (0/2), ismeretlen eredetű áttétes
daganatok (0/2), gyomordaganat (0/1), vastagbél-daganat (0/1), végbél-daganat (0/1), gégedaganat (0/1) és csecsemőmirigy-daganat
(0/1) esetén (vizsgált kóros esetek összesített száma = 29).
A PB0809 egy betegminta RNS vizsgálati próba festődésének kiértékelését segítő szűrőeszközként használatos.
Termékspecifikus korlátozások
Az RNA Negative Control Probe terméket a Leica Biosystems az Anti-Fluorescein Antibody antitesttel, a BOND Polymer Refine
Detection kittel és a BOND segédreagensekkel való használatra optimalizálta. A tesztelési eljárásoktól való eltérés esetén a felhasználó
felelőssége a betegeredmények értelmezése az adott körülmények között. A protokoll végrehajtásához szükséges idő a szövet
fixálásának és az enzimes emésztés hatékonyságának eltérései miatt változó lehet, ezért tapasztalati alapon történő meghatározást
igényel. A feltárási körülmények és a protokollidők optimalizálásakor használni kell az RNA Negative Control Probe készítményt.
Hibaelhárítás
A 3. számú hivatkozás segíthet a javító intézkedéseket illetően.
Szokatlan festődés bejelentéséhez forduljon a Leica Biosystems helyi forgalmazójához vagy regionális irodájához.
PB0809
Page 39
2
. Soha ne pipettázza szájjal a reagenseket, továbbá kerülje a bőr és a nyálkahártyák