Αντιμετώπιση Προβλημάτων - Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi

• Τα δείγματα, πριν και μετά τη μονιμοποίηση, καθώς και όλα τα υλικά που εκτίθενται σε αυτά, πρέπει να υποβάλλονται σε χειρισμό ως
δυνητικά μετάδοσης λοίμωξης και να απορρίπτονται με κατάλληλες προφυλάξεις
με το στόμα και αποφεύγετε την επαφή του δέρματος και των βλεννογόνων με αντιδραστήρια ή δείγματα. Εάν τα αντιδραστήρια ή τα
δείγματα έλθουν σε επαφή με ευαίσθητες περιοχές, πλύνετε με άφθονες ποσότητες νερού. Ζητήστε τη συμβουλή ιατρού.
• Συμβουλευτείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς ή τοπικούς κανονισμούς για απόρριψη τυχόν δυνητικώς τοξικών συστατικών.
• Ελαχιστοποιήστε τη μικροβιακή μόλυνση των αντιδραστηρίων, διότι διαφορετικά ενδέχεται να αυξηθεί η μη ειδική χρώση.
• Ανάκτηση, χρόνοι ή θερμοκρασίες επώασης διαφορετικές από εκείνες που καθορίζονται ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα
αποτελέσματα. Τυχόν τέτοια μεταβολή πρέπει να επικυρώνεται από το χρήστη.
Οδηγίες Χρήσης
Το RNA Negative Control Probe αναπτύχθηκε προς χρήση στο αυτοματοποιημένο σύστημα BOND (περιλαμβάνει το σύστημα Leica
BOND-MAX και το σύστημα Leica BOND-III), σε συνδυασμό με τα ακόλουθα: Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine
Detection και τα βοηθητικά αντιδραστήρια BOND. Το συνιστώμενο πρωτόκολλο χρώσης για το RNA Negative Control Probe είναι το ISH
Protocol A. Συνιστάται ενζυμική προεπεξεργασία με χρήση του BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, για 15 πρακτικά.
Θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται κατάλληλοι μάρτυρες ιστού και αντιδραστηρίου. Το πρωτόκολλο για τους μάρτυρες ιστού και
αντιδραστηρίου θα πρέπει να αντιστοιχεί στο πρωτόκολλο του ανιχνευτή εξέτασης RNA.
Ποιοτικός έλεγχος
Τυχόν διαφορές στην επεξεργασία των ιστών και τις τεχνικές διαδικασίες στο εργαστήριο του χρήστη ενδέχεται να προκαλέσουν
σημαντική μεταβλητότητα στα αποτελέσματα, καθιστώντας αναγκαία την τακτική εκτέλεση εσωτερικών ελέγχων επιπρόσθετα προς τις
ακόλουθες διαδικασίες.
Θετικός μάρτυρας ιστού
Χρησιμοποιείται για να υποδεικνύει σωστά παρασκευασμένους ιστούς και σωστές τεχνικές χρώσης. Θα πρέπει να περιλαμβάνεται
ένας θετικός μάρτυρας ιστού για κάθε σύνολο συνθηκών εξέτασης σε κάθε εκτέλεση χρώσης. Ένας ιστός με ασθενή θετική χρώση είναι
καταλληλότερος από έναν ιστό με ισχυρή θετική χρώση για βέλτιστο ποιοτικό έλεγχο και για την ανίχνευση πολύ μικρών επιπέδων τυχόν
αποδόμησης των αντιδραστηρίων.
Αρνητικός μάρτυρας ιστού
Θα πρέπει να εξετάζεται μετά από το θετικό μάρτυρα ιστού για επαλήθευση της ειδικότητας της σήμανσης του ανιχνευτή στο στόχο.
Εναλλακτικά, η ποικιλία διαφόρων κυτταρικών τύπων που υπάρχουν στις περισσότερες τομές ιστών παρέχει συχνά θέσεις αρνητικού
μάρτυρα, αλλά αυτό θα πρέπει να επαληθεύεται από το χρήστη.
Αρνητικός μάρτυρας αντιδραστηρίου
Χρησιμοποιήστε το RNA Negative Control Probe PB0809 αντί του ανιχνευτή εξέτασης RNA με μια τομή κάθε δείγματος ασθενούς, για να
αξιολογήσετε τη μη ειδική χρώση και να επιτρέψετε την καλύτερη ερμηνεία της ειδικής χρώσης στο στόχο.
Θετικός μάρτυρας αντιδραστηρίου
Χρησιμοποιήστε το RNA Positive Control Probe PB0785 αντί του ανιχνευτή εξέτασης RNA με μια τομή κάθε δείγματος ασθενούς, για να
παράσχετε πληροφορίες σχετικά με τη διατήρηση νουκλεϊκών οξέων στον ιστό, καθώς και την προσπελασιμότητα των νουκλεϊκών οξέων
από τον ανιχνευτή. Εάν το RNA Positive Control Probe δεν παρουσιάζει θετική χρώση, τα αποτελέσματα με τα δείγματα της εξέτασης θα
πρέπει να θεωρούνται άκυρα.
Ιστός ασθενούς
Εξετάστε τα δείγματα ασθενούς που έχουν υποστεί χρώση με τον ανιχνευτή εξέτασης RNA στο τέλος. Η ένταση της θετικής χρώσης θα
πρέπει να εκτιμάται στο πλαίσιο τυχόν μη ειδικής χρώσης υποβάθρου του RNA Negative Control Probe PB0809.
Αναμενόμενα Αποτελέσματα
Φυσιολογικοί ιστοί
Κατά τη χρήση του PB0809 δεν παρατηρήθηκε χρώση σε ένα μεγάλο εύρος ιστών. (Συνολικός αριθμός φυσιολογικών περιστατικών που
αξιολογήθηκαν = 96).
Νεοπλασματικοί ιστοί
Κατά τη χρήση του PB0809 δεν παρατηρήθηκε χρώση σε όγκους των ωοθηκών (0/3), όγκους του θυρεοειδή (0/3), όγκους του πνεύμονα
(0/3), όγκους του ήπατος (0/3), όγκους του εγκεφάλου (0/2), όγκους του οισοφάγου (0/2), όγκους του μαστού (0/2), όγκους του δέρματος
(0/2), μεταστατικούς όγκους αγνώστου προέλευσης (0/2), έναν όγκο του στομάχου (0/1), έναν όγκο του κόλου (0/1), έναν όγκο του
ορθού (0/1), έναν όγκο του λάρυγγα (0/1) και έναν όγκο του θύμου αδένα (0/1) (συνολικός αριθμός μη φυσιολογικών περιστατικών που
αξιολογήθηκαν = 29).
Το PB0809 συνιστάται επικουρικά ως εργαλείο παρακολούθησης για την αξιολόγηση της χρώσης ενός δοκιμαστικού ανιχνευτή
RNA σε ένα δείγμα ασθενή.
Ειδικοί Περιορισμοί Του Προϊόντος
Το RNA Negative Control Probe έχει βελτιστοποιηθεί στην Leica Biosystems για χρήση με το Anti-Fluorescein Antibody, το BOND
Polymer Refine Detection και τα βοηθητικά αντιδραστήρια BOND. Χρήστες που αποκλίνουν από τις συνιστώμενες διαδικασίες εξέτασης
πρέπει να αποδέχονται την ευθύνη για ερμηνεία των αποτελεσμάτων ασθενών υπό τις συνθήκες αυτές. Οι χρόνοι του πρωτοκόλλου
ενδέχεται να διαφέρουν, λόγω της μεταβλητότητας της μονιμοποίησης του ιστού και της αποτελεσματικότητας της ενζυμικής πέψης και
πρέπει να προσδιορίζονται εμπειρικά. Κατά τη βελτιστοποίηση των συνθηκών ανάκτησης και των χρόνων πρωτοκόλλου, πρέπει να
χρησιμοποιηθει RNA Negative Control Probe.
Αντιμετώπιση Προβλημάτων
Η παραπομπή 3 ενδέχεται να βοηθήσει στην ενέργεια αποκατάστασης.
Για να αναφέρετε περιπτώσεις ασυνήθους χρώσης, επικοινωνήστε με τον τοπικό σας διανομέα ή το περιφερειακό γραφείο της Leica
Biosystems.
PB0809
Page 23
2
. Μην αναρροφάτε ποτέ με πιπέτα τα αντιδραστήρια