Solución De Problemas - Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi

• Los tiempos de exposición e incubación, y las temperaturas diferentes de las especificadas pueden dar resultados erróneos.
Cualquier cambio que se produzca deberá ser validado por el usuario.
Instrucciones de Uso
RNA Negative Control Probe se ha desarrollado para usarse en el sistema automatizado BOND (incluye el sistema Leica BOND-MAX
y el sistema Leica BOND-III) en combinación con Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection y reactivos auxiliares
BOND. El protocolo de tinción recomendado para RNA Negative Control Probe es ISH Protocol A. El pretratamiento enzimático se
recomienda usando BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, durante 15 minutos.
Siempre se deben usar controles apropiados de tejidos y de reactivos. El protocolo para controles de tejidos y de reactivos debe
corresponder al de la sonda para el ensayo de ARN.
Control de calidad
Las diferencias en el procesamiento de los tejidos y en los procedimientos técnicos del laboratorio del usuario pueden producir una
variabilidad significativa en los resultados; por ello, es necesario que éste lleve a cabo regularmente sus propios controles, además de
los siguientes procedimientos.
Control positivo de tejido
Se utiliza para indicar la preparación correcta de los tejidos y las técnicas de tinción adecuadas. Debe incluirse un control positivo de
tejido por cada conjunto de condiciones de ensayo en cada serie de tinciones realizada. Un tejido con una tinción positiva débil es más
adecuado que un tejido con una tinción positiva intensa para un control de calidad óptimo y para detectar niveles bajos de degradación
del reactivo.
Control negativo de tejido
Debe examinarse después del control positivo de tejido, a fin de verificar la especificidad del marcado de la sonda en la diana. O bien, la
variedad de diferentes tipos de células presentes en la mayoría de los cortes de tejido ofrece con frecuencia lugares de control negativo,
pero esto debe ser verificado por el usuario.
Control negativo de reactivo
Utilice RNA Negative Control Probe PB0809 en lugar de la sonda para el ensayo de ARN con un corte de cada muestra del paciente a
fin de evaluar la tinción no específica y obtener una mejor interpretación de la tinción específica en la sonda.
Control positivo de reactivo
Utilice RNA Positive Control Probe PB0785 en lugar de la sonda para el ensayo de ARN con un corte de cada muestra del paciente a fin
de brindar información acerca de la conservación de los ácidos nucleicos en el tejido y de la accesibilidad de los ácidos nucleicos para
la sonda. Si RNA Positive Control Probe no muestra tinción positiva, los resultados de las muestras analizadas deben considerarse no
válidos.
Tejido del paciente
Examine las muestras del paciente teñidas con la sonda para el ensayo de ARN al final. La intensidad de la tinción positiva debe
valorarse en el contexto de cualquier tinción de fondo no específica de RNA Negative Control Probe PB0809.
Resultados Esperados
Tejidos normales
Al emplear PB0809, en una amplia gama de tejidos no se observó tinción. (Número total de casos normales evaluados = 96).
Tejidos tumorales
Al emplear PB0809 no se observó tinción en los cánceres ováricos (0/3), los cánceres tiroideos (0/3), los cánceres de pulmón (0/3), los
cánceres hepáticos (0/3), los tumores cerebrales (0/2), los cánceres esofágicos (0/2), los cánceres de mama (0/2), los cánceres de piel
(0/2), los cánceres metastásicos de origen desconocido (0/2), el cáncer gástrico (0/1), el cáncer de colon (0/1), el tumor rectal (0/1), el
cáncer de laringe (0/1) y el cáncer de timo (0/1). (Número total de casos anómalos evaluados = 29).
Se recomienda PB0809 como asistente de cribado para valorar la tinción del sensor de ARN de prueba en una muestra del
paciente.
Limitaciones Específicas del Producto
RNA Negative Control Probe se ha optimizado en Leica Biosystems para su uso con Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine
Detection y reactivos auxiliares BOND. Los usuarios que se aparten de los procedimientos de análisis recomendados deben asumir
la responsabilidad de interpretar los resultados del paciente tomando en cuenta estas circunstancias. Los tiempos de protocolo
pueden diferir debido a la variación en la fijación de los tejidos y a la eficacia en la digestión enzimática y deben ser determinados
empíricamente. Se debe utilizar RNA Negative Control Probe a la hora de optimizar las condiciones de detección y los tiempos de
protocolo.
Solución de Problemas
La referencia 3 puede ayudar en las acciones correctoras.
Contacte con su distribuidor local o la oficina regional de Leica Biosystems para informar de cualquier tinción anómala.
Para Obtener Más Información
Para obtener más información sobre hibridación in situ con reactivos BOND, consulte los apartados Principio del procedimiento, Material
necesario, Preparación de las muestras, Control de calidad, Verificación del análisis, Interpretación de la tinción, Clave de símbolos en
las etiquetas y Limitaciones generales de la sección "Utilización de Reactivos BOND" de la documentación de usuario suministrada por
BOND.
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