Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 9

• Tempi o temperature di incubazione diversi da quelli specificati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale modifica deve essere
validata dall'utente.
Istruzioni per L'uso
RNA Negative Control Probe è stato sviluppato per l'uso sul sistema BOND automatizzato (include il sistema Leica BOND-MAX e il
sistema Leica BOND-III) unitamente a Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection e con i reagenti ausiliari BOND. Il
protocollo di colorazione raccomandato per RNA Negative Control Probe è ISH Protocol A. Si raccomanda un pretrattamento enzimatico
usando BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 per 15 minuti.
Usare sempre controlli appropriati dei tessuti e dei reagenti. Il protocollo per i controlli dei tessuti e dei reagenti deve corrispondere a
quello della sonda test di RNA.
Controllo di qualità
Differenze nella lavorazione del tessuto e nei procedimenti tecnici in uso presso il laboratorio dell'utente possono produrre una
discrepanza significativa nei risultati, rendendo necessaria la regolare esecuzione di controlli interni in aggiunta alle procedure descritte
di seguito.
Controllo positivo del tessuto
È usato per indicare tessuti correttamente preparati e tecniche di colorazione appropriate. Per ogni gruppo di condizioni del test in ogni
ciclo di colorazione, deve essere incluso un controllo positivo del tessuto. Un tessuto a debole colorazione positiva è più adatto di uno a
forte colorazione positiva per un controllo di qualità ottimale e per rilevare livelli minimi di degradazione del reagente.
Controllo negativo del tessuto
Va esaminato dopo il controllo positivo del tessuto per verificare la specificità della marcatura della sonda sul bersaglio. In alternativa,
la varietà di tipi cellulari diversi presenti nella maggior parte delle sezioni tissutali offre spesso siti di controllo negativo, ma questo va
verificato dall'utente.
Controllo negativo del reagente
Usare RNA Negative Control Probe PB0809 al posto della sonda test di RNA con una sezione di ogni campione del paziente per
valutare la colorazione aspecifica e per consentire una migliore interpretazione della colorazione specifica in corrispondenza del
bersaglio.
Controllo positivo del reagente
Usare RNA Positive Control Probe PB0785 al posto della sonda test di RNA con una sezione di ogni campione del paziente per fornire
informazioni sulla preservazione degli acidi nucleici nel tessuto nonché sull'accessibilità degli acidi nucleici alla sonda. Se RNA Positive
Control Probe non dimostra alcuna colorazione positiva, i risultati dei campioni analizzati vanno considerati non validi.
Tessuto del paziente
Per ultimi, esaminare i campioni biologici del paziente colorati con la sonda test di RNA. L'intensità della colorazione positiva va
analizzata nel contesto di qualsiasi colorazione aspecifica di fondo di RNA Negative Control Probe PB0809.
Risultati Attesi
Tessuti normali
Utilizzando PB0809, non è stata osservata colorazione in una vasta gamma di tessuti. (Numero totale di casi normali esaminati = 96).
Tessuti neoplastici
Utilizzando PB0809, non è stata osservata colorazione in tumori ovarici (0/3), tumori tiroidei (0/3), tumori ai polmoni (0/3), tumori al
fegato (0/3), tumori al cervello (0/2), tumori esofagei (0/2), tumori mammari (0/2), tumori della pelle (0/2), tumori metastatici di origine
ignota (0/2), tumori allo stomaco (0/1), tumori del colon (0/1), tumori del retto (0/1), tumore della laringe (0/1) e tumore del timo (0/1)
(Numero totale di casi anormali esaminati = 29).
PB0809 è consigliata quale strumento di ausilio allo screening per valutare la colorazione di un RNA di prova su un campione
di pazienti.
Limitazioni Specifiche del Prodotto
La RNA Negative Control Probe è stata ottimizzata da Leica Biosystems per l'uso con l'Anti-Fluorescein Antibody, il BOND Polymer
Refine Detection e con i reagenti ausiliari BOND. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la
responsabilità dell'interpretazione dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base
alle variazioni nella fissazione del tessuto e nell'efficienza della digestione enzimatica e devono essere definiti in modo empirico.
Nell'ottimizzazione delle condizioni di riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare del RNA Negative Control Probe.
Individuazione e Risoluzione dei Problemi
Il riferimento bibliografico n. 3 può essere di aiuto per le azioni di rimedio.
Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all'ufficio di zona di Leica Biosystems.
Altre Informazioni
Altre informazioni sull'ibridazione in situ con i reagenti BOND si trovano in "Uso dei reagenti BOND" nella documentazione per l'utente
BOND, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verifica del saggio,
Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali.
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