Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 18

• As amostras, antes e depois da fixação, e todo o material que a elas seja exposto, devem ser manipulados como se fossem capazes
de transmitir infecção e eliminados usando as precauções adequadas
a pele e membranas mucosas e reagentes ou amostras. Se reagentes ou amostras entrarem em contacto com áreas sensíveis,
lave-as com uma quantidade abundante de água. Consulte um médico.
• Consulte os regulamentos federais, estatais e locais relativamente à eliminação de quaisquer componentes potencialmente tóxicos.
• Minimize a contaminação microbiana dos reagentes ou poderá ocorrer um aumento da coloração inespecífica.
• A utilização de tempos e temperaturas de recuperação e incubação diferentes dos especificados pode produzir resultados erróneos.
Qualquer alteração deste tipo deve ser validada pelo utilizador.
Instruções de Utilização
RNA Negative Control Probe foi desenvolvido para utilização no sistema automatizado BOND (inclui o sistema Leica BOND-MAX e o
sistema Leica BOND-III) juntamente com Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection e reagentes auxiliares BOND.
O protocolo de coloração recomendado para RNA Negative Control Probe é o ISH Protocol A. Recomenda-se o pré-tratamento
enzimático com BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, durante 15 minutos.
Devem ser sempre utilizados os controlos apropriados de tecidos e reagentes. O protocolo para os controlos de tecidos e reagentes
deve corresponder ao protocolo da sonda de teste de ARN.
Controlo de qualidade
As diferenças no processamento de tecidos e nos procedimentos técnicos do laboratório do utilizador podem produzir uma variabilidade
significativa de resultados, exigindo a realização regular de controlos internos além dos procedimentos a seguir descritos.
Controlo positivo do tecido
Utilizado para indicar os tecidos correctamente preparados e as técnicas de coloração adequadas. Cada conjunto de condições de
teste, em cada processo de coloração, deve incluir um controlo positivo do tecido. Um tecido com uma coloração positiva fraca é mais
adequado do que um tecido com uma coloração positiva forte para assegurar um controlo de qualidade óptimo e para detectar níveis
mínimos de degradação dos reagentes.
Controlo negativo do tecido
Este deve ser examinado depois do controlo positivo do tecido para verificar a especificidade da marcação da sonda em relação
ao alvo. Alternativamente, a variedade de diferentes tipos de células presentes na maior parte dos cortes tecidulares oferece
frequentemente locais de controlo negativo, no entanto, isto deve ser verificado pelo utilizador.
Controlo negativo do reagente
Utilize RNA Negative Control Probe PB0809 em vez da sonda de teste de ARN com um corte de cada amostra do doente para avaliar a
coloração não específica e permitir uma melhor interpretação da coloração específica no alvo.
Controlo positivo do reagente
Utilize RNA Positive Control Probe PB0785 em vez da sonda de teste de ARN com um corte de cada amostra do doente para dar
informações sobre a conservação dos ácidos nucleicos no tecido e sobre a acessibilidade dos ácidos nucleicos à sonda. Se RNA
Positive Control Probe não demonstrar uma coloração positiva, os resultados obtidos com as amostras do teste não devem ser
considerados válidos.
Tecido do doente
Examine, no fim, as amostras do doente coradas com a sonda de teste de ARN. A intensidade da coloração positiva deve ser avaliada
no contexto de qualquer coloração não específica de fundo de RNA Negative Control Probe PB0809.
Resultados Esperados
Tecidos normais
Utilizando o PB0809 não foi observada coloração numa grande variedade de tecidos. (Número total de casos normais avaliados = 96).
Tecidos tumorais
Utilizando o PB0809 não foi observada coloração em tumores ováricos (0/3), tumores da tiroide (0/3), tumores pulmonares (0/3),
tumores hepáticos (0/3), tumores cerebrais (0/2), tumores esofágicos (0/2), tumores mamários (0/2), tumores de pele (0/2), tumores
metastáticos de origem desconhecida (0/2), tumores do estômago (0/1), tumores do cólon (0/1), tumores do reto (0/1), um tumor da
laringe (0/1) e um tumor do timo (0/1) (Número total de casos anormais avaliados = 29).
O PB0809 é recomendado para ajudar como uma ferramenta de rastreio para avaliar a coloração de uma sonda de teste de
ARN numa amostra do paciente.
Limitações Específicas do Produto
A RNA Negative Control Probe foi optimizada na Leica Biosystems para utilização com o Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer
Refine Detection e reagentes auxiliares BOND. Utilizadores que se desviem dos procedimentos de teste recomendados devem assumir
a responsabilidade pela interpretação dos resultados dos doentes nestas circunstâncias. Os tempos de protocolo podem variar, devido
a variações na fixação tecidular e na eficácia de digestão enzimática , devendo ser determinados de forma empírica. Os RNA Negative
Control Probe deve ser utilizados quando se optimizam as condições de recuperação e os tempos do protocolo.
Resolução de Problemas
A Referência 3 pode ajudar na acção de resolução.
Entre em contacto com o seu distribuidor local ou com a sucursal regional da Leica Biosystems para notificar qualquer coloração pouco
habitual.
Informações Adicionais
Poderá encontrar informações adicionais sobre a hibridização in situ com reagentes BOND nas secções de Princípios do Procedimento,
Material Necessário, Preparação da Amostra, Controlo de Qualidade, Verificação do Ensaio, Interpretação da Coloração, Significado
dos Símbolos nos Rótulos e Limitações Gerais em "Utilizar os Reagentes BOND" na sua documentação do utilizador BOND.
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. Nunca pipete reagentes com a boca e evite o contacto entre