Résultats Attendus; Limites Spécifiques Au Produit; Dépannage; Autres Informations - Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi

• Les échantillons, avant et après la fixation, ainsi que tous les matériaux exposés à ces échantillons, doivent être traités comme s'ils
étaient susceptibles de transmettre une infection et éliminés avec les précautions qui s'imposent.2 Ne jamais pipeter les réactifs à la
bouche et éviter le contact de la peau et des membranes muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Rincer avec de grandes
quantités d'eau en cas de contact des réactifs ou des spécimens avec des zones sensibles. Demander conseil à un médecin.
• Consulter les réglementations nationales, régionales ou locales relatives à l'élimination des composants potentiellement toxiques.
• Minimiser la contamination microbienne des réactifs, faute de quoi un accroissement de la coloration non spécifique est susceptible
de se produire.
• La récupération ou des durées ou températures d'incubation autres que celles précisées peuvent donner des résultats erronés. Toute
modification de ces paramètres doit être validée par l'utilisateur.
Mode d'emploi
L'anticorps primaire PD-1 (CAL20) a été développé pour être utilisé sur le système automatisé BOND (dont les systèmes Leica
BOND-MAX et Leica BOND-III) en combinaison avec le BOND Polymer Refine Detection. Le protocole de coloration recommandé pour
l'anticorps primaire PD-1 (CAL20) est IHC Protocol F. La récupération d'épitopes induite par la chaleur est recommandée avec BOND
Epitope retrieval Solution 2 (AR9640) durant 20 minutes.
Résultats attendus
Tissus normaux
Clone CAL20 détecte la protéine PD-1 dans le cytoplasme/la membrane d'une certaine proportion de cellules immunitaires. Une
coloration de l'intérieur des cellules immunitaires a été observée dans la plupart des types de tissus, et en particulier dans les ganglions
lymphatiques, les amygdales, la rate et la glande thymus. Une coloration a également été observée dans les macrophages alvéolaires.
(Nombre total de cas normaux évalués = 135).
Tissus tumoraux
Clone CAL20 a coloré 3/101 lymphomes (dont 2/6 lymphomes angioimmunoblastiques à cellules T, 1/55 lymphomes à grandes
cellules B diffuses, 1/6 lymphomes anaplasiques à grandes cellules, 0/16 lymphomes à cellules T, 0/7 lymphomes de Hodgkin , 0/5
lymphomes à cellules B de zone marginale extra nodaux, 0/3 lymphomes folliculaires, 0/2 lymphomes de Burkitt et 0/1 lymphome
non spécifié) et 1/5 tumeurs de la thyroïde (dont 1/1 carcinome folliculaire, 0/3 adénomes folliculaires et 0/1 carcinome papillaire de la
thyroïde). Aucune coloration (autre que des cellules immunitaires infiltrantes) n'a été détectée dans les tumeurs de l'intestin (0/8) (dont
0/6 adénocarcinomes et 0/2 adénomes), tumeurs métastatiques (0/5), tumeurs du sein (0/5) (dont 0/3 carcinome canalaire invasif et
0/2 fibroadénome), carcinomes hépatocellulaires (0/4), tumeurs du cerveau (0/4) (dont 0/3 méningiome et 0/1 astrocytome), tumeurs
du poumon (0/4) (dont 0/2 carcinomes à cellules squameuses, 0/1 adénocarcinome et 0/1 carcinome à petites cellules), tumeurs des
ovaires (0/3) (dont 0/1 tumeur des cellules de la granulosa, 0/1 adénocarcinome et 0/1 adénocarcinome de l'endomètre), carcinomes
à cellules squameuses de l'œsophage (0/3), adénocarcinomes de l'estomac (0/3), tumeurs des glandes surrénales (0/2) (dont 0/1
adénome cortical et 0/1 carcinome corticosurrénal), carcinomes à cellules transitionnelles de la vessie (0/2), tumeurs des os (0/2) (dont
0/1 ostéosarcome et 0/1 chondrosarcome), carcinomes à cellules squameuses du col de l'utérus (0/2), adénocarcinomes de l'endomètre
(0/2), carcinomes à cellules claires du rein (0/2), adénocarcinomes de la prostate (0/2), tumeurs des glandes salivaires (0/2) (dont
0/1 adénome pléomorphe, 0/1 carcinome cystique adénoïde), tumeurs de la peau (0/2) (dont 0/1 carcinomes à cellules squameuses,
0/1 mélanome), séminomes (0/2), un adénocarcinome oral (0/1), un adénocarcinome pancréatique (0/1), un carcinome à cellules
squameuses de la langue et une hyperplasie de la prostate (Nombre total de cas évalués = 169)
Le PD-1 (CAL20) est recommandé pour la détection de la protéine PD-1 dans les tissus normaux et néoplasiques, en
complément à l'histopathologie traditionnelle utilisant des marqueurs histochimiques non immunologiques.
Limites spécifiques au produit
PD-1 (CAL20) a été optimisé chez Leica Biosystems pour une utilisation avec BOND Polymer Refine Detection et les réactifs auxiliaires
BOND. Les utilisateurs qui s'écartent des procédures de test recommandées doivent accepter la responsabilité de l'interprétation des
résultats de patient dans ces circonstances. La durée du protocole peuvent varier en raison de différences dans la fixation de tissu et de
l'efficacité de l'amplification de l'antigène, et doivent être déterminées de manière empirique. Des réactifs de contrôle auxiliaires négatifs
doivent être utilisés lors de l'optimisation des conditions de récupération et de la durée du protocole.
Dépannage
Consultez la référence 3 pour les mesures correctives.
Contacter le distributeur local ou le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler une coloration inhabituelle.

Autres informations

De plus amples informations concernant l'immunomarquage avec les réactifs BOND, sous les rubriques Principes de la procédure, Matériel
nécessaire, Préparation de l'échantillon, Contrôle de qualité, Vérification du test, Interprétation de la coloration, Légendes des symboles sur
les étiquettes et Limites générales, se trouvent dans « Utilisation des réactifs BOND » dans la documentation utilisateur BOND.
Bibliographie
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Wang C, Hillsamer P and Kim CH. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T
cell subsets. BMC Immunology. 2011; 12:53.
5. Roncador G, Garcia Verdes-Montenegro J, Tedoldi S et al. Expression of two markers of germinal center T cells (SAP and PD-1) in
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica 2007; 92:1059-1066.
6. Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaie MS et al. Programmed Death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Date de publication
03 avril 2020
PA0216
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