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Behandeln Sie Präparate vor und nach der Fixierung sowie sämtliche damit in Berührung kommenden Materialien so, als ob sie
Infektionen übertragen könnten und entsorgen Sie sie mit den entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen
niemals mit dem Mund und vermeiden Sie den Kontakt von Haut oder Schleimhäuten mit Reagenzien oder Präparaten. Falls
Reagenzien oder Präparate mit empfindlichen Bereichen in Kontakt kommen, spülen Sie diese mit reichlich Wasser. Holen Sie
anschließend ärztlichen Rat ein.
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Beachten Sie bei der Entsorgung potentiell giftiger Bestandteile die behördlichen und örtlichen Vorschriften.
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Mikrobielle Kontaminationen sollten minimiert werden, da es sonst zu einer Zunahme unspezifischer Färbungen kommen kann.
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Die Verwendung anderer als die angegebenen Retrievals, Inkubationszeiten oder Temperaturen kann zu fehlerhaften Ergebnissen
führen. Diesbezügliche Änderungen müssen vom Anwender selbst getestet werden.
Gebrauchsanweisung
RNA Negative Control Probe wurde zur Nutzung auf dem automatisierten BOND-System (bestehend aus dem Leica BOND-MAX-
System und dem Leica BOND-III-System) in Kombination mit Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection und BOND-
Zusatzreagenzien optimiert entwickelt. ISH Protocol A ist das empfohlene Färbeprotokoll für RNA Negative Control Probe. Es wird eine
Enzymvorbehandlung unter Anwendung von BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 für 15 Minuten.
Es sind stets geeignete Gewebe- und Reagenzkontrollen zu nutzen. Das Protokoll für die Gewebe- und Reagenzkontrollen sollte dem
für die RNA-Testsonde entsprechen.
Qualitätskontrolle
Unterschiede bei der Gewebebearbeitung und den technischen Verfahren im Labor des Benutzers können zu signifikanten
Schwankungen bei den Ergebnissen führen. Daher ist es wichtig, zusätzlich zu den folgenden Verfahren regelmäßige laborinterne
Kontrollen durchzuführen.
Positive Gewebekontrolle
Zeigt korrekt vorbereitete Gewebe und korrekte Färbetechniken an. In jedem Färbelauf sollte für jeden Satz Testbedingungen eine
positive Gewebekontrolle durchgeführt werden. Gewebe mit schwach positiver Färbung ist für die optimale Qualitätskontrolle und den
Nachweis kleiner Minderungen in der Reagenzleistung besser geeignet, als ein Gewebe mit stark positiver Färbung.
Negative Gewebekontrolle
Sollte im Anschluss an die positive Gewebekontrolle durchgeführt werden, um die Spezifität der Zielsondenmarkierung zu verifizieren.
Alternativ bietet die Vielfalt unterschiedlicher Zelltypen, die in den meisten Gewebeschnitten vorliegen, häufig Stellen für eine negative
Kontrolle. Jedoch sollte dies vom Benutzer verifiziert werden.
Negative Reagenzkontrolle
Zur Beurteilung einer unspezifischen Färbung und zur besseren Bewertung einer spezifischen Färbung an der Zielstelle ist mit einem
Schnitt jedes Patientenpräparates RNA Negative Control Probe PB0809 anstelle der RNA-Testsonde zu verwenden.
Positive Reagenzkontrolle
Verwenden Sie RNA Positive Control Probe PB0785 anstelle der RNA-Testsonde bei einem Schnitt jedes Patientenpräparates, um
Informationen über die Erhaltung von Nukleinsäuren in dem Gewebe und die Zugänglichkeit von Nukleinsäuren zu der Sonde zu
erhalten. Falls RNA Positive Control Probe keine positive Färbung nachweisen kann, sollten die mit den Testproben erzielten Ergebnisse
als ungültig betrachtet werden.
Patientengewebe
Die mit der RNA-Testsonde gefärbten Patientenproben müssen zuletzt untersucht werden. Eine positive Färbeintensität ist im Kontext
einer unspezifischen Hintergrundfärbung der RNA Negative Control Probe PB0809 zu bewerten.
Erwartete Ergebnisse
Normale Gewebe
PB0809 zeigte keinerlei Färbung in einem breiten Spektrum von Gewebeproben. (Anzahl der insgesamt untersuchten
Normalgewebeproben = 96).
Tumorgewebe
Mit PB0809 wurde bei Tumoren von Eierstöcken (0/3), Schilddrüse (0/3), Lunge (0/3), Leber (0/3), Gehirn (0/2), Ösophagus (0/2), Brust
(0/2), Haut (0/2), metastatischen Tumoren unbekannten Ursprungs (0/2) und je einem Tumor von Magen (0/1), Colon (0/1), Rektum
(0/1), Larynx (0/1) und Thymus (0/1) keine Färbung nachgewiesen. (Anzahl der insgesamt untersuchten pathologischen Gewebeproben
= 29).
PB0809 wird zur Unterstützung beim Screening zur Beurteilung der Anfärbung einer RNA-Testsonde in einer Patientenprobe
empfohlen.
Produktspezifische Einschränkungen
RNA Negative Control Probe wurde von Leica Biosystems zur Verwendung mit dem Anti-Fluorescein Antibody, dem BOND Polymer
Refine Detection und BOND-Zusatzreagenzien optimiert. Anwender, die andere als die empfohlenen Testverfahren verwenden,
müssen unter diesen Umständen die Verantwortung für die Auswertung der Patientenergebnisse übernehmen. Die Verfahrenszeiten
können aufgrund von Unterschieden in der Gewebefixierung und der Wirksamkeit der enzymatischen Verdauung variieren und müssen
empirisch bestimmt werden. Bei der Optimierung der Retrieval-Bedingungen und Verfahrenszeiten sollte RNA Negative Control Probe
verwendet werden.
Fehlersuche
Maßnahmen zur Abhilfe beim Auftreten von Fehlern finden Sie in Referenz 3.
Falls Sie ungewöhnliche Färbeergebnisse beobachten, wenden Sie sich an Ihre örtliche Vertriebsfirma oder die Regionalniederlassung
von Leica Biosystems.
PB0809
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. Pipettieren Sie Reagenzien
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