Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 27

Brugsanvisning
RNA Negative Control Probe er udviklet til brug for det automatiserede BOND-systemet (bestående af Leica BOND-MAX-systemet og
Leica BOND-III-systemet) i kombination med Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection og BOND-hjælpereagenser.
Brugere. Den anbefalede farvningsprotokol for RNA Negative Control Probe er ISH Protocol A. Til enzymforbehandling, som anbefales,
bruges BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 i 15 minutter.
Der skal altid bruges egnede vævs- og reagenskontroller. Protokollen for vævs- og reagenskontrollerne skal svare til protokollen for RNA
testproben.
Kvalitetskontrol
Forskelle i behandlingen af væv og forskelle i tekniske procedurer i brugerens laboratorium kan frembringe betydeligt varierende
resultater og nødvendiggøre regelmæssig udførelse af kontroller på stedet ud over nedenstående procedurer.
Positiv vævskontrol
Anvendes til påvisning af, at vævet er fremstillet korrekt, og at der er anvendt korrekte farvningsteknikker. Der bør inkluderes en positiv
vævskontrol for hvert sæt testbetingelser i hver farvekørsel. Svagt positivt farvet væv er mere egnet end kraftigt positivt farvet væv til
optimal kvalitetskontrol og påvisning af små niveauer af reagensnedbrydning.
Negativ vævskontrol
Skal undersøges efter den positive vævskontrol for at verificere specificiteten af mærkningen af proben i forhold til målstedet.
Alternativt frembyder de mange forskellige celletyper, der er til stede i de fleste vævssnit, ofte negative kontrolsteder, men dette skal
verificeres af brugeren.
Negativ reagenskontrol
Brug RNA Negative Control Probe PB0809 i stedet for RNA testproben på et snit af hver patientprøve for at vurdere uspecifik farvning og
muliggøre bedre fortolkning af specifik farvning på målstedet.
Positiv reagenskontrol
Brug RNA Positive Control Probe PB0785 i stedet for RNA testproben på et snit af hver patientprøve for at undersøge holdbarheden af
kernesyrerne og samtidig probens tilgængelighed til kernesyrerne. Hvis RNA Positive Control Probe ikke udviser positiv farvning, må
testresultatet fortolkes som ikke brugbart.
Patientvæv
Undersøg patientprøver farvet med RNA test proben sidst. Intensiteten af positiv farvning skal bedømmes i sammenhæng med uspecifik
baggrundsfarvning af RNA Negative Control Probe PB0809.
Forventede Resultater
Normala væv
Ved brug af PB0809 blev der ikke observeret farvning i en lang række væv. (Samlet antal evaluerede, normale tilfælde = 96).
Tumorvæv
Ved brug af PB0809 blev der ikke observeret farvning i ovarietumorer (0/3), skjoldbruskkirteltumorer (0/3), lungetumorer (0/3),
levertumorer (0/3), hjernetumorer (0/2), spiserørstumorer (0/2), brysttumorer (0/2), hudtumorer (0/2), metastatiske tumorer af ukendt
oprindelse (0/2), mavetumorer (0/1), tyktarmstumorer (0/1), endetarmstumorer (0/1), en strubehovedtumor (0/1) og en thymuskirteltumor
(0/1) (Samlet antal evaluerede, unormale tilfælde = 29).
Det anbefales at anvende PB0809 som et screeningsværktøj til at vurdere farvning af en RNA-testsonde på en patientprøve.
Produktspecifikke Begrænsninger
RNA Negative Control Probe er blevet optimeret hos Leica Biosystems til brug sammen med Anti-Fluorescein antibody, BOND
Polymer Refine Detection og BOND-hjælpereagenser. Brugere, som afviger fra anbefalede testprocedurer, må selv tage ansvaret
for fortolkningen af patientresultater under disse betingelser. Protokoltiderne kan variere på grund af variationer i vævsfiksering og
effektiviteten af enzymatisk nedbrydning og skal bestemmes empirisk. Der skal anvendes RNA Negative Control Probe ved optimering af
genfi ndingsbetingelser og protokoltider.
Fejlfinding
Reference 3 kan være til hjælp ved afhjælpende foranstaltninger.
Kontakt den lokale distributør eller Leica Biosystems' regionale kontor for at rapportere usædvanlig farvning.
Yderligere Oplysninger
Yderligere oplysninger om in situ-hybridisering med BOND-reagenser kan findes i "Anvendelse af BOND-reagenser" i BOND-
brugerdokumentationen under overskrifterne Proceduremæssige principper, Nødvendige materialer, Præparatklargøring,
Kvalitetskontrol, Analyseverifikation, Fortolkning af farvning, Nøgle til symboler på etiketter og Generelle begrænsninger.
Referencer
1. Pringle JH, Primrose L, Kind CN, et al. In situ hybridization demonstration of poly-adenylated RNA sequences in formalin-fixed
paraffin sections using a biotinylated oligonucleotide poly d(T) probe. Journal of Pathology. 1989;158(4):279—286.
2. Lewin B. Units of transcription and translation: the relationship between heterogeneous nuclear RNA and messenger RNA. Cell.
1975;4:11—20.
3. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
4. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
5. Wilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) In situ Hybridization A practical approach. 2
Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.18—20.
Udgivelsesdato
26 februar 2020
nd
PB0809
Page 26