Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 49

• Aby otrzymać egzemplarz karty charakterystyki, należy skontaktować się z lokalnym dystrybutorem lub regionalnym biurem Leica
Biosystems, lub odwiedzić stronę internetową, www.LeicaBiosystems.com.
• Z próbkami przed utrwaleniem i po utrwaleniu, jak również ze wszystkimi materiałami, które mają z nimi styczność, należy obchodzić
się tak, jak z materiałami potencjalnie zakaźnymi i należy je utylizować, zachowując odpowiednie środki ostrożności.
pobierania pipetą nie wolno zasysać odczynników ustami i należy unikać kontaktu odczynników i preparatów ze skórą oraz błonami
śluzowymi. W razie kontaktu odczynników lub próbek ze szczególnie narażonymi miejscami przemyć miejsce kontaktu dużą ilością
wody. Należy zasięgnąć porady lekarza.
• Wszelkie potencjalnie toksyczne składniki należy utylizować zgodnie z krajowymi lub lokalnymi przepisami.
• Chronić odczynniki przed skażeniem drobnoustrojami, ponieważ może ono doprowadzić do zwiększonego barwienia
niespecyficznego.
• Zastosowanie czasów odzyskiwania, inkubacji lub temperatur innych niż podano w instrukcji może spowodować błędne wyniki.
Wszelkie zmiany tego typu muszą zostać zweryfikowane przez użytkownika.
Instrukcja stosowania
Preparat RNA Negative Control Probe został opracowany z myślą o zastosowaniu w automatycznym systemie BOND (obejmującym
systemy Leica BOND-MAX i Leica BOND-III system) w połączeniu z Anti-Fluorescein Antibody oraz BOND Polymer Refine Detection
i pomocniczymi odczynnikami BOND. Zalecany protokół barwienia dla RNA Negative Control Probe to ISH Protocol A. Zalecane jest
odmaskowywanie enzymu przy użyciu zestawu BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 przez 15 minut.
Zawsze należy stosować odpowiednie kontrole tkanek i odczynników. Protokół kontroli tkanek i odczynników powinien odpowiadać
protokołowi z sondy do badań RNA.
Kontrola jakości
Różnice w przetwarzaniu tkanek i procedurach technicznych w laboratorium użytkownika mogą doprowadzić do znacznej zmienności
wyników, co oznacza konieczność dodatkowego przeprowadzania regularnych kontroli wewnętrznych.
Tkankowa kontrola pozytywna
Stosowana w celu wskazania prawidłowo przygotowanych tkanek i prawidłowych technik barwienia. W każdej serii barwienia każdy
zestaw warunków testowych powinien uwzględniać jedną tkankową kontrolę pozytywną.
Do optymalnej kontroli jakości i do wykrywania niewielkich poziomów degradacji odczynników bardziej nadaje się tkanka o słabym
barwieniu pozytywnym niż tkanka o silnym barwieniu pozytywnym.
Tkankowa kontrola negatywna
Należy ją wykonać po tkankowej kontroli pozytywnej, aby sprawdzić swoistość znakowania docelowej substancji przez sondę.
Ewentualnie tkankowa kontrola negatywna może obejmować różne typy komórek obecne w większości skrawków tkankowych, jednak
powinno to zostać zweryfikowane przez użytkownika.
Negatywna kontrola odczynnika
Aby przeprowadzić ocenę barwienia niespecyficznego oraz umożliwić lepszą interpretację barwienia specyficznego należy użyć RNA
Negative Control Probe PB0809 zamiast sondy RNA na każdym skrawku z próbki pobranej od pacjenta.
Pozytywna kontrola odczynnika
Aby uzyskać informacje o zachowaniu kwasów nukleinowych w tkance, a także o możliwości znakowania kwasów nukleinowych przez
sondę, należy użyć RNA Positive Control Probe PB0785 zamiast sondy RNA na każdym skrawku z próbki pobranej od pacjenta. Jeśli
RNA Positive Control Probe nie wykaże odpowiedniego pozytywnego barwienia, wyniki testu przeprowadzonego na próbkach pobranych
od pacjenta należy uznać za nieważne.
Tkanka pacjenta
Próbki pacjenta barwione sondą RNA należy badać jako ostatnie. Intensywność barwienia pozytywnego należy oceniać w kontekście
ewentualnego niespecyficznego barwienia tła w RNA Negative Control Probe PB0809.
Oczekiwane wyniki
Tkanki prawidłowe
Przy zastosowaniu PB0809 w wielu tkankach nie stwierdzono barwienia. (Łączna liczba ocenionych prawidłowych przypadków = 96).
Tkanki patologiczne
Używając PB0809 nie obserwowano barwienia w guzach jajnika (0/3), guzach tarczycy (0/3), guzach płuc (0/3), guzach wątroby (0/3),
guzach mózgu (0/2), guzach przełyku ( 0/2), guzach sutka (0/2), rakach skóry (0/2), guzach przerzutowych o nieznanym pochodzeniu
(0/2), guzach żołądka (0/1), guzach okrężnicy (0/1), guzie odbytnicy (0/1), guzie krtani (0/1) i guzie grasicy (0/1) (całkowita liczba
ocenionych przypadków patologicznych = 29).
Zaleca się stosowanie preparatu PB0809 jako narzędzia przesiewowego do oceny barwienia sondy RNA na próbce pobranej od
pacjenta.
Szczególne ograniczenia dla produktu
Preparat RNA Negative Control Probe został zoptymalizowany w Leica Biosystems pod kątem stosowania z Anti-Fluorescein Antibody,
BOND Polymer Refine Detection i pomocniczymi odczynnikami BOND. W tych okolicznościach użytkownicy, którzy postępują
niezgodnie z zalecanymi procedurami testowymi muszą wziąć odpowiedzialność za interpretację wyników chorego. Czasy protokołu
mogą być różne w związku ze zróżnicowaniem w zakresie utrwalenia tkanek i skuteczności trawienia enzymatycznego - należy je
określić doświadczalnie. Podczas optymalizacji warunków odmaskowywania i czasów protokołu należy stosować RNA Negative Control
Probe.
2
Podczas
PB0809
Page 48