Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 32

Bruksanvisning
RNA Negative Control Probe ble utviklet for bruk på automatiserte BOND-systemet (herunder Leica BOND-MAX-systemet og Leica
BOND-III-systemet) i kombinasjon med Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection og BOND tilhørende reagenser. Den
anbefalte fargeprotokollen for RNA Negative Control Probe er ISH Protocol A. Til enzymatisk forbehandling, anbefales det å bruke BOND
Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1, i 15 minutter.
Egnede vev og reagens bør alltid benyttes. Protokollen for vev og reagenser skal tilsvare den RNA-test sonde.
Kvalitetskontroll
Forskjeller i behandlingen av vev og forskjeller i tekniske prosedyrer i brukerens laboratorium kan gi betydelig variasjon i resultatene, og
det kan være nødvendig å foreta regelmessige kontroller på stedet i tillegg til prosedyrene angitt nedenfor.
Positiv vevskontroll
Brukes for å påvise korrekt vevspreparering og fargeteknikker.
Én positiv vevskontroll bør inkluderes for hvert sett med testbetingelser i hver fargerunde. Svakt positivt farget vev er mer egnet enn
kraftig positivt farget vev til optimal kvalitetskontroll og påvisning av små nivåer reagensnedbrytning.
Negativ vevskontroll
Skal undersøkes etter den positive vevskontrollen for å sikre at proben merker målet spesifikt. Alternativt har de mange ulike celletypene
som finnes i de fleste vevssnittene ofte negative kontrollsteder, men dette må verifiseres av brukeren.
Negativ reagenskontroll
Bruk RNA Negative Control Probe PB0809 i stedet for RNA-testproben på et snitt av hver pasientprøve for å vurdere uspesifikk farging
og for å muliggjøre bedre fortolkning av spesifikk farging på målet.
Positiv reagenskontroll
Bruk RNA Positive Control Probe PB0785 i stedet for RNA-testproben på et snitt av hver pasientprøve for å få informasjon om
preservering av nukleinsyrer i vevet, så vel som tilgjengelighet av nukleinsyrer til proben. Hvis RNA Positive Control Probe ikke viser
positiv farging, skal resultatene til testprøvene anses som ugyldige.
Pasientvev
Undersøk pasientprøver farget med RNA-testprobe sist. Intensiteten av positiv farging bør vurderes i sammenheng med eventuell
uspesifikk bakgrunnsfarging av RNA Negative Control Probe PB0809.
Forventede resultater
Normalt vev
Ved bruk av PB0809 ble ingen farging observert i et stort utvalg av vev. (Totalt antall evaluerte normale tilfeller = 96).
Tumorvev
Ved bruk av PB0809 ble ingen farging observert i ovarietumorer (0/3), thyreoideatumorer (0/3), lungetumorer (0/3), levertumorer (0/3),
hjernetumorer (0/2), tumorer i spiserør (0/2), brysttumorer (0/2), hudtumorer (0/2), metastatiske tumorer av ukjent opprinnelse (0/2),
magetumorer (0/1), tumorer i kolon (0/1), tumorer i rektum (0/1), en tumor i larynx (0/1) og en tumor i thymus (0/1) (Totalt antall evaluerte
unormale tilfeller = 29).
PB0809 anbefales brukt som et screeningverktøy for å vurdere farging med RNA-testprobe på en pasientprøve.
Produktspesifikke begrensninger
RNA Negative Control Probe er optimalisert av Leica Biosystems til bruk sammen med Anti-Fluorescein antibody, BOND Polymer Refine
Detection og BOND tilleggsreagenser. Brukere som avviker fra de anbefalte testprosedyrene, må selv ta ansvar for
tolkningen av pasientresultater i slike situasjoner. Protokolltidene kan variere grunnet variasjon i vevsfiksering og effektiviteten
til enzymatisk fordøyelse, og må dermed bestemmes empirisk. RNA Negative Control Probe bør brukes ved optimalisering av
gjenvinningsforhold og protokolltider.
Feilsøking
Se referanse nr. 3 for opprettingstiltak.
Ta kontakt med den lokale forhandleren eller regionkontoret til Leica Biosystems for å rapportere om unormal farging.
Ytterligere opplysninger
Du finner mer informasjon om in situ hybridisering med BOND-reagenser i "Bruk av BOND-reagenser" i brukerdokumentasjonen for
BOND-systemet under overskriftene Testprinsipper, Materiell som kreves, Preparering av prøver, Kvalitetskontroll, Analysekontroll,
Tolkning av farging, Oversikt over symboler og Generelle begrensninger.
Referanser
1. Pringle JH, Primrose L, Kind CN, et al. In situ hybridization demonstration of poly-adenylated RNA sequences in formalin-fixed
paraffin sections using a biotinylated oligonucleotide poly d(T) probe. Journal of Pathology. 1989;158(4):279—286.
2. Lewin B. Units of transcription and translation: the relationship between heterogeneous nuclear RNA and messenger RNA. Cell.
1975;4:11—20.
3. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
4. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
5. Wilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) In situ Hybridization A practical approach. 2
Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.18—20.
Utgivelsesdato
26 februar 2020
PB0809
Page 31
nd