Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 29

• Minimaliseer de kans op microbiële contaminatie van reagentia. Als u dit niet doet, kan er een toename van niet-specifieke kleuring
optreden.
• Terugwinning, incubatietijden of temperaturen die afwijken van de specificaties kunnen foutieve resultaten geven. Zulke
veranderingen moeten worden gevalideerd door de gebruiker.
Gebruiksaanwijzing
RNA Negative Control Probe is ontwikkeld voor gebruik op het automatische BOND systeem (waaronder het Leica BOND-MAX-systeem
en het Leica BOND-III-systeem), in combinatie met BOND Polymer Refine Detection. Het aanbevolen kleuringsprotocol voor RNA
Negative Control Probe is ISH Protocol A. Het aanbevolen protocol voor voorbehandeling en kleuring wordt bepaald door de specifieke
oligonucleotide ISH probe die wordt getest.
Gebruik altijd geschikte controles voor weefsel en reagens. Het protocol voor de controle van weefsel en reagens dient overeen te
stemmen met het protocol van de RNA-testprobe.
Kwaliteitscontrole
Verschillen in weefselverwerking en technische procedures in het laboratorium van de gebruiker kunnen significante verschillen in
resultaten geven, wat het noodzakelijk maakt regelmatig interne controles uit te voeren in aanvulling op de volgende procedures.
Positieve weefselcontrole
Wordt gebruikt om te bevestigen dat weefsels correct geprepareerd zijn en dat passende kleuringstechnieken zijn gebruikt.
Er dient één positieve weefselcontrole te worden opgenomen voor iedere set testcondities waarin de kleuring wordt uitgevoerd. Voor
optimale kwaliteitscontrole en detectie van lichte degeneratie van de reagens is een weefsel met zwakke positieve kleuring meer
geschikt dan een weefsel met sterke positieve kleuring.
Negatieve weefselcontrole
Dient te worden onderzocht ná het positieve controleweefsel, om de specificiteit van de labeling van de probe met het target te
verifiëren. De verscheidenheid aan celtypen die in de meeste weefselcoupes aanwezig zijn levert vaak negatieve controlelocaties op,
maar dit moet wel worden geverifieerd door de gebruiker.
Negatieve reagenscontrole
Gebruik RNA Negative Control Probe PB0809 in plaats van de RNA testprobe met een coupe van ieder patiëntenmonster om niet-
specifieke kleuring te evalueren en specifieke kleuring bij het target beter te kunnen interpreteren.
Positieve reagenscontrole
Gebruik RNA Positive Control Probe PB0785 in plaats van de RNA testprobe met een coupe van ieder patiëntenmonster om informatie
te verkrijgen over het behoud van nucleïnezuren in het weefsel, en over toegankelijkheid van nucleïnezuren voor de probe. Als de RNA
Positive Controle Probe geen positieve kleuring vertoont, moeten de resultaten die op basis van testmonsters zijn verkregen als ongeldig
worden beschouwd.
Patiëntenweefsel
Bekijk patiëntenmonsters gekleurd met RNA testprobe als laatste. Bepaal de intensiteit van de positieve kleuring binnen de context van
iedere niet-specifieke achtergrondkleuring van de RNA Negative Control Probe PB0809.
Verwachte Resultaten
Normale weefsels
Bij gebruik van PB0809 is er in een breed scala aan weefsels geen kleuring waargenomen. (Totaal aantal beoordeelde normale gevallen
= 96).
Tumorweefsels
Bij gebruik van PB0809 werd geen kleuring waargenomen in ovariumtumoren (0/3), schildkliertumoren (0/3), longtumoren (0/3),
levertumoren (0/3), hersentumoren (0/2), slokdarmtumoren (0/2), borsttumoren (0/2), huidtumoren (0/2), gemetastaseerde tumoren van
onbekende oorsprong (0/2), maagtumoren (0/1), colontumoren (0/1), rectumtumoren (0/1), een tumor van de larynx (0/1) en een tumor
van de thymus (0/1). (Totaal aantal beoordeelde afwijkende gevallen = 29).
PB0809 wordt aanbevolen als screeningsinstrument om kleuring van een RNA-testprobe bij patiëntenmonsters te evalueren.
Productspecifieke beperkingen
RNA Negative Control Probe is door Leica Biosystems geoptimaliseerd voor gebruik met Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer
Refine Detection en BOND hulpreagentia. Gebruikers die van de aanbevolen testprocedures afwijken, moeten verantwoordelijkheid
nemen voor interpretatie van patiëntresultaten onder deze omstandigheden. De protocoltijden kunnen verschillen als gevolg van variatie
in weefselfixatie en de effectiviteit van enzymatische vertering, en moeten empirisch worden vastgesteld. Gebruik RNA Negative Control
Probe bij optimalisatie van de omstandigheden voor terugwinning, en van protocoltijden.
Probleemoplossing
Referentie 3 helpt mogelijk bij foutherstelling.
Neem contact op met uw lokale distributeur of het regionale kantoor van Leica Biosystems om ongebruikelijke kleuring te melden.
Nadere informatie
Nadere informatie over in situ hybridisatie met BOND reagentia, onder de kopjes Principe van de procedure, Benodigde materialen,
Monsterpreparatie, Kwaliteitscontrole, Testverificatie, Interpretatie van kleuring, Uitleg bij symbolen op etiketten en Algemene
beperkingen, kunt u vinden in "Het gebruik van BOND reagentia" in de gebruikersdocumentatie behorende bij BOND.
PB0809
Page 28