Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 55

• Minimalizujte mikrobiální kontaminaci reagencií, mohlo by dojít ke zvýšení výskytu nespecifického barvení.
• Získávání, inkubační doby nebo teploty jiné než specifikované mohou vést k chybným výsledkům. Všechny takové změny musí být
uživatelem validovány.
Návod k použití
Sonda RNA Negative Control Probe byla vyvinuta k použití v automatickém systému BOND (včetně systému Leica BOND-MAX a Leica
BOND-III) v kombinaci s Anti-Fluorescein Antibody, soupravou BOND Polymer Refine Detection a pomocnými reagenciemi BOND.
Protokol doporučeného barvení pro sondu RNA Negative Control Probe je ISH Protocol A. Odmaskování enzymu je doporučeno za
použití soupravy BOND Enzyme Pre-treatment Kit, Enzyme 1 na 15 minut.
Vždy se musí použít příslušné tkáňové a reagenční kontroly. Protokol tkáňové a reagenční kontroly musí odpovídat kontrolám RNA
testovací sondy.
Kontrola jakosti
Rozdíly ve zpracování tkání a v technických postupech v laboratoři uživatele mohou způsobit významnou variabilitu výsledků, což
vyžaduje kromě níže uvedených postupů i pravidelné provádění kontrol v laboratoři.
Pozitivní tkáňová kontrola
Používá se k průkazu správně připravených tkání a správných barvicích technik. V každém barvicím cyklu musí být použita jedna
pozitivní tkáňová kontrola pro každý soubor testovacích podmínek.
Pro optimální kontrolu jakosti a k detekci menšího stupně degradace reagencie je vhodnější tkáň se slabým pozitivním barvením než
tkáň se silným pozitivním barvením.
Negativní tkáňová kontrola
Musí být vyšetřena po pozitivní tkáňové kontrole k ověření specificity označení sondy podle cílové tkáně. Alternativně často představuje
místa negativní kontroly řada různých typů buněk přítomných ve většině tkáňových řezů, to ale musí uživatel validovat.
Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení cílové tkáně použijte na řezu z každého
vzorku
pacienta kontrolu RNA Negative Control Probe PB0809 namísto tetovací sondy RNA.
Pozitivní reagenční kontrola
K získání informací o konzervaci nukleových kyselin ve tkáni a přístupnosti nukleových kyselin pro sondu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta kontrolu RNA Positive Control Probe PB0785 namísto tetovací sondy RNA. Pokud sonda RNA Positive Control Probe
nevykazuje pozitivní barvení, musí být výsledky testovaných vzorků považovány za neplatné.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí RNA testovací sondy. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu
se vším nespecifickým barvením pozadí u sondy RNA Negative Control Probe PB0809.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Při použití PB0809 nebylo barvení pozorováno u mnoha různých tkání. (Celkový počet normálních vyšetřovaných tkání = 96).
Abnormální tkáně
Při použití sondy PB0809 nebylo pozorováno žádné barvení u vzorků nádoru ovarií (0/3), nádoru štítné žlázy (0/3), nádoru plic (0/3),
nádoru jater (0/3), nádoru mozku (0/2), nádoru jícnu (0/2), nádoru prsu (0/2), nádoru kůže (0/2), metastatických nádorů neznámého
původu (0/2), nádoru žaludku (0/1), nádoru tlustého střeva (0/1), nádoru rekta (0/1), nádoru hrtanu (0/1) a nádoru thymu (0/1). (Celkový
počet vyšetřovaných abnormálních případů = 29).
Sonda PB0809 se používá jako screeningový nástroj k vyhodnocení barvení RNA testovací sondy ve vzorku pacienta.
Omezení specifická pro tento produkt
Sonda RNA Negative Control Probe byla společností Leica Biosystems optimalizována pro použití s Anti-Fluorescein Antibody,
soupravou BOND Polymer Refine Detection a s pomocnými reagenciemi BOND. Uživatelé, kteří se při vyšetření odchýlí od
doporučeného postupu, musí za těchto okolností přijmout odpovědnost za interpretaci výsledků u pacienta. Doby uvedené v protokolu
se mohou lišit v důsledku odchylek při fixaci tkání a účinnosti enzymatické digesce a musí být stanoveny empiricky. Při optimalizaci
podmínek při získávání a dob v protokolu musí být použita sonda RNA Negative Control Probe.
Řešení problémů
Odkaz 3 může napomoci při provádění nápravných opatření.
S hlášením neobvyklého barvení kontaktujte místního distributora nebo oblastní kancelář společnosti Leica Biosystems.
Další informace
Další informace o hybridizaci in situ reagenciemi BOND naleznete pod názvy Princip metody, Potřebné materiály, Příprava vzorku,
Kontrola kvality, Ověření testů, Interpretace barvení, Vysvětlení symbolů na štítcích a Obecná omezení v uživatelské dokumentaci
BOND, v bodě „Použití reagencií BOND".
PB0809
Page 54