Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 58

• So vzorkami pred fixáciou a po nej a všetkými materiálmi, ktoré s nimi prišli do kontaktu, je nutné manipulovať ako s potenciálne
infekčnými a zlikvidovať ich pri dodržaní zodpovedajúcich bezpečnostných opatrní
kontaktu činidiel a vzoriek s kožou a sliznicami. Ak sa činidlá alebo vzorky dostanú do kontaktu s citlivými oblasťami, umyte ich
veľkým množstvom vody. Vyhľadajte lekársku pomoc.
• Likvidáciu prípadných potenciálne toxických súčastí definujú federálne, štátne alebo miestne predpisy.
• Minimalizujte mikrobiálnu kontamináciu činidiel. V opačnom prípade môže dôjsť k zvýšeniu nešpecifického zafarbenia.
• Nedodržanie predpísaných dôb záchytu, inkubačných dôb alebo teplôt môže viesť k nesprávnym výsledkom. Všetky takéto zmeny si
vyžadujú validáciu používateľom.
Návod na použitie
Sonda RNA Negative Control Probe bola vytvorená na použitie v automatizovanom systéme BOND (zahŕňa systémy Leica BOND-MAX
a Leica BOND-III) v kombinácii s Anti-Fluorescein Antibody, systémom BOND Polymer Refine Detection a pomocnými činidlami BOND.
Odporúčaný protokol farbenia pre sondu RNA Negative Control Probe je ISH Protocol A. Na vyhľadávanie enzýmov sa odporúča použiť
súpravu BOND Enzyme Pre-treatment Kit, Enzyme 1, po dobu 15 minút.
Vždy sa musia používať vhodné kontroly tkanivom a činidlom. Protokol pre kontroly tkanivom a činidlom musí zodpovedať protokolu pre
testovaciu sondu RNA.
Kontrola kvality
Rozdiely v spracovaní tkaniva a technických postupoch v laboratóriu používateľa môžu viesť k významnému kolísaniu výsledkov, čo si
vyžaduje, okrem nasledujúcich postupov, aj pravidelné interné kontroly.
Pozitívna kontrola tkanivom
Identifikuje správne pripravené tkanivá a správne techniky zafarbenia. Každá súprava testových podmienok v každom cykle zafarbenia
musí obsahovať jednu pozitívnu kontrolu tkanivom.
Tkanivo so slabým pozitívnym farbením je na optimálnu kontrolu kvality a na detekciu slabšej degradácie činidla vhodnejšie než tkanivo
so silným pozitívnym farbením.
Negatívna kontrola tkanivom
Nutné vyšetriť po pozitívnej kontrole tkanivom s cieľom overiť špecificitu značenia sondy na cieli. Ako negatívnu kontrolu je možné použiť
aj rôzne typy buniek prítomné vo väčšine tkanivových rezov, takýto postup si však vyžaduje validáciu používateľom.
Negatívna kontrola činidlom
Na vyhodnotenie nešpecifického zafarbenia použite sondu RNA Negative Control Probe PB0809 namiesto testovacej sondy RNA s
rezom jednotlivých vzoriek pacienta, čo umožní lepšiu interpretáciu špecifického farbenia cieľa.
Pozitívna kontrola činidlom
Použitie sondy RNA Positive Control Probe PB0785 namiesto testovacej sondy RNA s rezom vzorky jednotlivých pacientov poskytne
informácie o zachovaní nukleových kyselín v tkanive, ako aj o dostupnosti nukleových kyselín pre sondu. Ak sonda RNA Positive Control
Probe nebude vykazovať pozitívne zafarbenie, výsledky testovaných vzoriek je nutné považovať za neplatné.
Tkanivo pacienta
Pacientske vzorky zafarbené testovacou sondou RNA preskúmajte ako posledné. Intenzitu pozitívneho farbenia je nutné vyhodnotiť v
kontexte prípadného nešpecifického zafarbenia sondy RNA Negative Control Probe PB0809 na pozadí.
Očakávané výsledky
Normálne tkanivá
Pri použití PB0809 nebolo pozorované žiadne zafarbenie na širokej škále rôznych tkanív. (Celkový počet normálnych vyšetrených
prípadov = 96).
Abnormálne tkanivá
Pri používaní PB0809 sa nezistilo žiadne zafarbenie pri nádoroch vaječníkov (0/3), nádoroch štítnej žľazy (0/3), nádoroch pľúc (0/3),
nádoroch pečene (0/3), nádoroch mozgu (0/2), nádoroch pažeráka (0/2), nádoroch prsníka (0/2), nádoroch kože (0/2), metastatických
nádoroch neznámeho pôvodu (0/2), nádoroch žalúdka (0/1), nádoroch hrubého čreva (0/1), nádoroch konečníka (0/1), nádore hrtana
(0/1) a nádore detskej žľazy (0/1) (celkový počet hodnotených abnormálnych prípadov = 29).
PB0809 sa odporúča ako skríningový nástroj na zhodnotenie zafarbenia testovacej sondy RNA na vzorke pacienta.
Špecifické obmedzenia pre tento výrobok
Sonda RNA Negative Control Probe bola v spoločnosti Leica Biosystems optimalizovaná na použitie s Anti-Fluorescein Antibody, so
systémom BOND Polymer Refine Detection a pomocnými činidlami BOND. Používatelia, ktorí sa odchýlia od odporúčaných testovacích
postupov, musia akceptovať zodpovednosť za interpretáciu výsledkov pacienta za týchto okolností. Časyjednotlivých protokolov sa môžu
líšiť z dôvodu odchýlok vo fixácii tkaniva a účinnosti enzymatického zhustenia a musia sa zistiť empiricky. Pri optimalizácii podmienok
vyhľadávania a časov jednotlivých protokolov je potrebné použiť sondu RNA Negative Control Probe.
Riešenie problémov
Pri náprave môže byť nápomocná referencia 3.
Neobvyklé zafarbenie ohláste miestnemu distribútorovi alebo regionálnej pobočke spoločnosti Leica Biosystems.
PB0809
Page 57
2
. Činidlá nikdy nepipetujte ústami a zabráňte