Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 34

• Belirtilenlerin dışındaki geri alma, inkübasyon süreleri veya sıcaklıklar hatalı sonuçlara neden olabilir. Bu gibi değişiklikler kullanıcı
tarafından doğrulanmalıdır.
Kullanım talimatları
RNA Negative Control Probe BOND Polymer Refine Detection ile kombinasyon halinde otomatik BOND sistemi (Leica BOND-MAX
sistemini ve Leica BOND-III sistemini de içermektedir) üzerinde kullanılmak için geliştirilmiştir. RNA Negative Control Probe için önerilen
boyama protokolü ISH Protocol A'dır. BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 kullanılarak 15 dakika boyunca de enzim ön işlemi
tavsiye edilir.
Her zaman uygun doku ve reaktif kontrolleri kullanılmalıdır. Doku ve reaktif kontrolleri protokolü RNA test probunun protokolüne uygun
olmalıdır.
Kalite Kontrol
Kullanıcının laboratuvarındaki doku işleme ve teknik prosedürlerdeki farklılıklar sonuçlarda anlamlı değişkenliğe yol açarak aşağıdaki
prosedürlere ek olarak düzenli şekilde şirket içi kontrollerin gerçekleştirilmesini gerektirebilir.
Pozitif Doku Kontrolü
Doğru şekilde hazırlanmış dokuları ve uygun boyama tekniklerini göstermek için kullanılır.
Her boyama döngüsünde her test koşulu setine bir pozitif doku kontrolü dahil edilmelidir. Minör düzeydeki reaktif bozulmalarını saptamak
için zayıf pozitif boyama yapılan bir doku optimal kalite kontrol için güçlü pozitif boyama yapılmış bir dokudan daha uygundur.
Negatif Doku Kontrolü
Prob etiketinin hedefe göre spesifikliğini doğrulamak için pozitif doku kontrolünden sonra incelenmesi gerekir. Alternatif olarak, birçok
doku kesitinde bulunan farklı hücre tipleri sık sık negatif kontrol alanları sunar, fakat bu kullanıcı tarafından doğrulanmalıdır.
Negatif Reaktif Kontrolü
Spesifik olmayan boyamayı değerlendirmek ve hedefteki spesifik boyamanın daha iyi şekilde yorumlanmasını sağlamak için her hasta
numunesinin bir kesiti ile RNA test probu yerine RNA Negative Control Probe PB0809'u kullanın.
Pozitif Reaktif Kontrolü
Dokudaki nükleik asitlerin korunması ve nükleik asitlerin proba ulaşabilirliği hakkında bilgi sağlamak için her hasta numunesinin bir kesiti
ile RNA test probu yerine RNA Positive Control Probe PB0785'i kullanın. RNA Positive Control Probe'un pozitif boyama gösteremediği
durumlarda, test numuneleri ile elde edilen sonuçlar geçersiz olarak kabul edilmelidir.
Hasta Dokusu
En son RNA test probu ile boyanmış hasta numunelerini inceleyin. Pozitif boyama yoğunluğu şu probun spesifik olmayan arka plan
boyaması bağlamında değerlendirilmelidir: RNA Negative Control Probe PB0809.
Öngörülen Sonuçlar
Normal Dokular
PB0809 kullanıldığında çok sayıda dokuda boyama gözlemlenmemiştir. (Değerlendirilen toplam normal vaka sayısı = 96).
Tümörlü Dokular
PB0809 kullanıldığında ovaryen tümörleri (0/3), tiroid tümörleri (0/3), akciğer tümörleri (0/3), karaciğer tümörleri (0/3), beyin tümörleri
(0/2), özofagus tümörleri (0/2), göğüs tümörleri (0/2), cilt tümörleri (0/2), bilinmeyen nedenden meydana gelen metastatik tümörler (0/2),
mide tümörleri (0/1), kolon tümörleri (0/1), rektal tümörler (0/1), larinks tümörü (0/1) ve timüs tümöründe (0/1) boyama gözlemlenmemiştir
(Değerlendirilen toplam anormal vaka sayısı = 29).
PB0809 bir hasta numunesinde RNA test probu boyamasını değerlendirmek için bir tarama aracı yardımcısı olarak tavsiye
edilir.
Ürüne Özgü Sınırlamalar
RNA Negative Control Probe Leica Biosystems'te Anti-Fluorescein antibody, BOND Polymer Refine Detection ve BOND yardımcı
reaktifleri ile kullanım için optimize edilmiştir. Tavsiye edilen test prosedürlerine riayet etmeyen kullanıcılar bu koşullar altında hasta
sonuçların yorumlanması ile ilgili sorumluluğu üstlenmelidir. Protokol süreleri doku fiksasyonundaki varyasyon ve enzimatik sindirimin
etkililiği nedeniyle farklılık gösterebilir ve ampirik olarak belirlenmelidir. RNA Negative Control Probe geri alma koşulları ve protokol
süreleri optimize edilirken kullanılmalıdır.
Sorun Giderme
Referans 3 sorunların giderilmesinde faydalı olabilir.
Olağandışı boyamayı bildirmek için yerel distribütörünüz veya Leica Biosystems bölge ofisi ile iletişime geçin.
Daha Fazla Bilgi
BOND reaktifleri in situ hibridizasyon hakkında daha fazla bilgi BOND kullanıcı dokümantasyonundaki "BOND Reaktiflerinin Kullanımı"
içinde Prosedür Prensibi, Gerekli Malzemeler, Numunenin Hazırlanması, Kalite Kontrol, Miktar Tayini Doğrulaması, Boyamanın
Yorumlanması, Etiket Üzerindeki Sembollerin Açıklaması ve Genel Sınırlamalar başlıkları altında bulunabilir.
Referanslar
1. Pringle JH, Primrose L, Kind CN, et al. In situ hybridization demonstration of poly-adenylated RNA sequences in formalin-fixed
paraffin sections using a biotinylated oligonucleotide poly d(T) probe. Journal of Pathology. 1989;158(4):279—286.
2. Lewin B. Units of transcription and translation: the relationship between heterogeneous nuclear RNA and messenger RNA. Cell.
1975;4:11—20.
PB0809
Page 33