Leica BIOSYSTEMS BOND Ready-to-Use ISH RNA Negative Control Probe PB0809 Mode D'emploi page 52

• Sledite zveznim, državnim ali lokalnim predpisom za odstranjevanje katerih koli morebitno strupenih sestavin.
• Pazite, da ne pride do mikrobne okužbe reagentov, saj lahko povzroči nespecifično barvanje.
• Če uporabite čas ali temperature razkrivanja in inkubacije, ki se razlikujejo od navedenih, lahko pridobite napačne rezultate.
Uporabnik mora validirati morebitne spremembe.
Navodila za uporabo
Sonda RNA Negative Control Probe je bila razvita za uporabo na avtomatiziranem sistemu BOND (vključuje sistem Leica BOND-MAX in
sistem Leica BOND-III) skupaj s sistemoma Anti-Fluorescein Antibody, BOND Polymer Refine Detection in pomožnimi reagenti BOND.
Priporočeni protokol za barvanje za sondo RNA Negative Control Probe je ISH Protocol A. Priporočeni način pridobivanja encimov je z
uporabo BOND Enzyme Pretreatment Kit, Enzyme 1 za 15 minut.
Vedno morate uporabljati ustrezne kontrolna tkiva in reagente. Protokol za kontrolna tkiva in kontrolne reagente mora biti primeren za
test s sondo RNA.
Kontrola kakovosti
Razlike pri obdelavi tkiva in tehničnih postopkih v laboratoriju uporabnika lahko vodijo do precejšnje variabilnosti rezultatov, kar zahteva
redne interne kontrole učinkovitosti poleg spodaj navedenih postopkov.
Pozitivni kontrolni vzorci tkiva
Uporabite jih za opredelitev pravilno pripravljenih tkiv in ustreznih tehnik barvanja. Pri vsakem postopku barvanja morate vsakemu
sklopu preizkusnih pogojev dodati en pozitiven kontrolni vzorec tkiva.
Za najboljšo kontrolo kakovosti in zaznavanje manjših ravni razpadanja reagentov je tkivo s šibkim pozitivnim obarvanjem bolj primerno
kot tkivo z močnim pozitivnim obarvanjem.
Negativni kontrolni vzorci tkiva
Pregledati jih morate po pregledu pozitivnih kontrolnih vzorcev tkiva, da preverite specifičnost označevanja tarče s sondo. Drugače pa
se kot negativni kontrolni vzorci pogosto uporablja vrsta različnih celic, ki so prisotne v večini rezin tkiv, vendar pa mora tako uporabo
preveriti uporabnik.
Negativni kontrolni reagent
Za oceno nespecifičnega obarvanja in boljšo razlago specifičnega obarvanja uporabite kontrolni reagent RNA Negative Control Probe
PB0809 namesto testne sonde RNA z eno rezino vsakega vzorca bolnika.
Pozitivni kontrolni reagent
Da preverite ohranjenost nukleinskih kislin v tkivu ter dostopnost nukleinskih kislin sondi, uporabite kontrolni reagent RNA Positive
Control Probe PB0785 namesto testne sonde RNA z eno rezino vsakega vzorca bolnika. Če sonda RNA Positive Control Probe ne kaže
pozitivnega obarvanja, morate rezultate vzorcev šteti za neveljavne.
Bolnikovo tkivo
Nazadnje preglejte bolnikove vzorce, obarvane s testno sondo RNA. Intenzivnost pozitivnega obarvanja morate oceniti v kontekstu
morebitnega nespecifičnega obarvanja ozadja v kontrolnem vzorcu z izdelkom RNA Negative Control Probe PB0809.
Pričakovani rezultati
Normalna tkiva
Z izdelkom PB0809 niso opazili obarvanja številnih drugih tkiv. (Skupno število ocenjenih normalnih primerov = 96).
Nenormalna tkiva
Pri uporabi PB0809 niso opazili obarvanja pri tumorjih jajčnikov (0/3), tumorjih ščitnice (0/3), pljučnih tumorjih (0/3), tumorjih na jetrih
(0/3), možganskih tumorjih (0/2), ezofagealnih tumorjih (0/2), tumorjih na dojkah (0/2), kožnih tumorjih (0/2), metastatskih tumorjih
neznanega izvora (0/2), želodčnih tumorjih (0/1), tumorjih kolona (0/1), rektalnih tumorjih (0/1), tumorju grla (0/1) in tumorju priželjca (0/1)
(Skupno število ocenjenih nenormalnih primerov = 29).
PB0809 se priporoča kot orodje presejanja za oceno barvanja pri testu s sondo RNA na bolnikovem vzorcu.
Specifične omejitve izdelka
Družba Leica Biosystems je sondo RNA Negative Control Probe optimizirala za uporabo s Anti-Fluorescein Antibody, s sistemom BOND
Polymer Refine Detection in pomožnimi reagenti BOND. Uporabniki, ki odstopijo od priporočenih preizkusnih postopkov, morajo prevzeti
odgovornost za razlago bolnikovih rezultatov pod temi pogoji. Trajanje protokola se lahko spreminja zaradi sprememb pri fiksaciji tkiva in
učinkovitosti encimske razgradnje, zato ga je treba določiti empirično. Pri optimizaciji pogojev pridobivanja in trajanja protokola morate
uporabiti izdelek RNA Negative Control Probe.
Odpravljanje težav
Referenca 3 lahko pomaga pri ukrepanju za odpravljanju napake.
Če želite poročati o nenavadnem obarvanju, se obrnite na svojega lokalnega distributerja ali regionalno pisarno družbe Leica
Biosystems.
Dodatne informacije
Dodatne informacije o hibridizaciji in situ z reagenti BOND so na voljo v priloženi dokumentaciji za uporabnika »Uporaba reagentov
BOND« v poglavjih Načelo postopka, Potrebni materiali, Priprava vzorcev, Kontrola kakovosti, Verifikacija testa, Razlaga obarvanja,
Legenda simbolov na oznakah in Splošne omejitve.
PB0809
Page 51