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BOND Polymer Refine Detection
Référence: DS9800
Utilisation Prévue
Ce système de détection est destiné au diagnostic in vitro.
BOND Polymer Refine Detection est un système conjugué peroxydase de raifort (HRP) polymèreanticorps de liaison, sans biotine,
servant à la détection d'anticorps IgG liés au tissu, de souris et de lapin, et de certains anticorps primaires IgM de souris. Il sert à
colorer des coupes tissulaires, fixées dans le formol et incluses dans la paraffine, avec le système automatisé BOND (qui comprend les
systèmes Leica BOND-MAX et Leica BOND-III).
L'interprétation clinique de tout marquage ou de son absence doit s'accompagner d'études morphologiques et de contrôles appropriés
complémentaires. Les résultats doivent être évalués en tenant compte des antécédents cliniques du patient et d'autres tests de
diagnostic réalisés par un pathologiste qualifié.
Le kit de détection BOND Polymer Refine Detection Kit doit être employé selon les meilleures pratiques de laboratoire dans le cadre de
l'utilisation des contrôles tissulaires. Par précaution, les laboratoires doivent marquer chaque échantillon de patient en liaison avec les
tests positifs, négatifs ou les autres contrôles tissulaires spécifiques en tant que de besoin.
Résumé et Explications
Des techniques immunohistochimiques permettent de mettre en évidence l'existence d'antigènes tissulaires ou cellulaires (voir
"Utilisation des réactifs BOND" dans la documentation utilisateur BOND).
BOND Polymer Refine Detection utilise une technologie nouvelle de polymérisation contrôlée pour préparer les conjugués HRP
polymère-anticorps de liaison. Le système de détection permet de ne pas utiliser de streptavidine et de biotine, ce qui évite toute
coloration non spécifique provenant de la biotine endogène.
BOND Polymer Refine Detection fonctionne de la manière suivante:
•
L'échantillon est incubé avec du peroxyde d'hydrogène pour inhiber l'activité peroxydase endogène.
•
Un anticorps primaire spécifique fourni par l'utilisateur est appliqué.
•
Un réactif d'adaptation aux IgG post-primaires localise les anticorps de souris.
•
Un réactif IgG à HRP polymérique localise les anticorps de lapin.
•
Le chromogène du substrat, de la 3,3'-tétrahydrochlorure hydrate de Diaminobenzidine (DAB), met en évidence le complexe sous la
forme d'un précipité marron.
•
La contre-coloration à l'hématoxyline (bleue) permet de visualiser les noyaux des cellules.
L'utilisation du BOND Polymer Refine Detection en association avec le système automatisé BOND réduit le risque d'erreur humaine et la
variabilité inhérente à la réalisation, par un individu, des opérations de dilution, de pipetage et de dépôt du réactif.
Réactifs Fournis
Réactifs permettant de réaliser 200–300 analyses.
1. Peroxide Block (30 ml), peroxyde d'hydrogène à 3–4% (v/v).
2. Post Primary (30 ml), IgG de lapin anti-souris (<10 mg/mL) dans 10 % (v/v) de sérum animal dans une solution saline tamponnée de
Tris/ProClin™ 950 à 0,1 %.
3. Polymer (30 ml), Poly-HRP-IgG anti-lapin (<25 μg/mL) contenant 10 % (v/v) de sérum animal dans une solution saline tamponnée de
Tris/ProClin™ 950 à 0,1 %.
4. DAB Part 1 (2.4 ml) 66 mM 3,3'-tétrahydrochlorure hydrate de Diaminobenzidine, en solution stabilisatrice.
5. DAB Part B (30 ml), peroxyde d'hydrogène à ≤0,1% (v/v) en solution stabilisatrice.
6. DAB Part B (30 ml), peroxyde d'hydrogène à ≤0,1% (v/v) en solution stabilisatrice.
7. Hematoxylin (30 ml), hématoxyline à <0,1%.
Dilution et Mélange
BOND Polymer Refine Detection est optimisé pour être utilisé avec le système BOND. Il n'est pas nécessaire de reconstituer, de
mélanger, de diluer ou de titrer les réactifs.
Matériel Nécessaire Mais Non Fourni
Se reporter à "Utilisation des réactifs BOND" dans la documentation utilisateur BOND pour avoir la liste complète du matériel nécessaire
pour le traitement des échantillons et la coloration immunohistochimique lors de l'utilisation du système BOND.
Conservation et Stabilité
Conserver entre 2–8 °C. Ne pas congeler. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l'étiquette de la poignée du plateau.
Replacer entre 2–8 °C immédiatement après l'avoir utilisé.
Aucun signe n'indique l'instabilité du produit de manière manifeste. Il est donc nécessaire de réaliser, en parallèle, des contrôles positifs
et négatifs en utilisant des échantillons inconnus (se reporter à "Contrôle qualité" dans la section "Utilisation des réactifs BOND" de la
documentation utilisateur BOND).
Si vous observez une coloration inattendue ne pouvant pas s'expliquer par des variations dans la façon de procéder du laboratoire,
ou en cas de problème attribué au système de détection, contacter aussitôt votre distributeur local ou le siège régional de Leica
Biosystems.
Toute condition de conservation différente de celles indiquées auparavant doit être vérifiée par l'utilisateur
.
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