Leica BIOSYSTEMS BOND Polymer Refine Detection DS9800 Mode D'emploi page 35

BOND Polymer Refine Detection
Nr katalogowy: DS9800
Przeznaczenie
Ten odczynnik jest przeznaczony do diagnostyki in vitro.
BOND Polymer Refine Detection jest pozbawionym biotyny systemem sprzężonych przeciwciał zawierającym linker polimerowy
peroksydazy chrzanowej (HRP) do wykrywania pierwszorzędowych przeciwciał tkankowych króliczych IgG i niektórych mysich IgG.
Przeznaczony do barwienia skrawków tkanki utrwalonej w formalinie, zatopionej w parafinie przy użyciu automatycznego systemu BOND
(w tym w systemach Leica BOND-MAX i Leica BOND-III).
Kliniczną interpretację wybarwienia lub jego braku należy uzupełnić badaniami morfologicznymi oraz odpowiednimi kontrolami.
Ocenę powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w kontekście historii choroby pacjenta oraz innych badań diagnostycznych.
The BOND Polymer Refine Detection Kit należy stosować zgodnie z dobrymi praktykami laboratoryjnymi dotyczącymi kontroli tkankowej.
Dla pewności laboratoria powinny barwić wszystkie próbki pobrane od pacjenta, stosując potrzebne kontrole pozytywne, negatywne
i inne kontrole specyficzne dla danej tkanki.
Podsumowanie i objaśnienie
W celu wykazania obecności antygenów w tkankach i komórkach (zob. „Korzystanie z odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika
BOND) można skorzystać z technik immunohistochemicznych.
BOND Polymer Refine Detection wykorzystuje nową technologię kontrolowanej polimeryzacji do przygotowania sprzężonych przeciwciał
zawierających polimeryczny linker HRP. Ten system detekcji nie wykorzystuje streptawidyny ani biotyny, co pozwala wyeliminować
ryzyko niespecyficznego barwienia spowodowanego biotyną endogenną.
BOND Polymer Refine Detection działa w następujący sposób:
• Próbkę inkubuje się z nadtlenkiem wodoru, aby stłumić endogenną aktywność peroksydazy.
• Stosowane jest specyficzne przeciwciało pierwszorzędowe dostarczone przez użytkownika.
• Linker Post Primary IgG lokalizuje mysie przeciwciała.
• Odczynnik Poly-HRP IgG lokalizuje królicze przeciwciała.
• Pierwszy chromogen substratu, tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny (DAB), wizualizuje mysie przeciwciała, tworząc brązowy osad.
• Barwienie kontrastowe hematoksyliną (niebieską) umożliwia wizualizację jąder komórkowych.
Używanie BOND Polymer Refine Detection w połączeniu z automatycznym systemem BOND ogranicza prawdopodobieństwo
popełnienia błędu przez człowieka i nieodłączną zmienność wynikającą z indywidualnego rozcieńczania odczynnika, ręcznego
pipetowania i stosowania odczynnika.
Odczynniki znajdujące się w zestawie
Odczynniki wystarczają na wykonanie 200-300 testów:
1. Peroxide Block (30 ml) 3-4% (v/v) nadtlenek wodoru.
2. Post Primary (30 ml) Królicze anty-mysie IgG (<10 μg/ml) w 10% (v/v) surowicy zwierzęcej w roztworze soli fizjologicznej buforowanej
odczynnikiem Tris/0,1% ProClin ™ 950.
3. Polymer rAP (30 ml) anty-mysi polimer HRP (<25μg/ml) zawierający 10% (v/v) surowicę zwierzęcą w roztworze soli fizjologicznej
buforowanej odczynnikiem Tris i 0,1% ProClin™ 950.
4. DAB Part 1 (2,4 ml) 66 mM uwodnionego tetrachlorowodorku 3,3'-diaminobenzydyny w roztworze stabilizowanym.
5. DAB Part B (30 ml) ≤0,1% (v/v) Nadtlenek wodoru w roztworze stabilizowanym.
6. DAB Part B (30 ml) ≤0,1% (v/v) Nadtlenek wodoru w roztworze stabilizowanym.
7. Hematoxylin (30 ml) <0,1% hematoksyliny.
Rozcieńczanie i mieszanie.
BOND Polymer Refine Detection jest zoptymalizowany pod kątem użycia w systemie BOND. W przypadku tego odczynnika nie jest
konieczne dodawanie wody, mieszanie, rozcieńczanie ani miareczkowanie.
Wymagane materiały niedołączone do zestawu
W rozdziale „Korzystanie z odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika BOND podano pełną listę materiałów wymaganych do
przygotowania próbki i barwienia immunohistochemicznego przy użyciu systemu BOND.
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie zamrażać. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie umieszczonej na
uchwycie tacki. Niezwłocznie po użyciu ponownie umieścić w temperaturze 2-8 °C.
Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu; w związku z tym kontrole pozytywne i negatywne powinny być
prowadzone jednocześnie z badaniem nieznanych próbek (patrz „Kontrola jakości" w rozdziale „Korzystanie z odczynników BOND"
w dokumentacji użytkownika BOND).
W przypadku zaobserwowania nieoczekiwanego barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i które
może wskazywać na problem systemu detekcji, należy natychmiast skontaktować się z lokalnym dystrybutorem lub regionalnym biurem
Leica Biosystems.
Przechowywanie w warunkach innych od wskazanych powyżej wymaga weryfikacji użytkownika .
1
DS9800
Page 34