Leica BIOSYSTEMS BOND Polymer Refine Detection DS9800 Mode D'emploi page 13

BOND Polymer Refine Detection
Nº de catálogo: DS9800
Utilização Previsto
Este sistema de detecção é próprio para aplicações diagnósticas in vitro.
BOND Polymer Refine Detection é um sistema conjugado de anticorpos, livre de biotina, de ligação à HRP (ou peroxidase polimérica de
armorácio) próprio para a detecção da IgG de ratinho e coelho ligada aos tecidos e de alguns anticorpos primários da IgM de ratinho.
O sistema foi concebido para corar seções de tecido fixado em formalina e envolvido em parafina no sistema automatizado BOND
(inclui osistema Leica BOND-MAX e o sistema Leica BOND-III).
A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deverá ser acompanhada por estudos morfológicos e controlos
apropriados complementares. Estes resultados devem ser avaliados no contexto dos antecedentes clínicos do doente e de outros
testes de diagnóstico por um patologista qualificado.
O kit de detecção BOND Polymer Refine Detection Kit deve ser utilizado segundo as melhores práticas laboratoriais relativas a
controlos tecidulares. Como garantia, os laboratórios devem corar cada amostra do doente juntamente com os controlos positivo e
negativo e com outros controlos tecidulares específicos, conforme for necessário.
Sumario e Explicação
Podem se usar técnicas imunohistoquímicas para demonstrar a presença de antígenos em tecido e células, (ver "Como usar reagentes
BOND" na documentação do usuário).
BOND Polymer Refine Detection emprega uma nova tecnologia de polimerização controlada para preparar conjugados de anticorpo
polimérico de ligação à HRP. O sistema de detecção evita o uso de estreptavidina e de biotina, eliminando assim a coloração não
específica como resultado da biotina endógena.
BOND Polymer Refine Detection funciona da seguinte maneira:
• A amostra é incubada com peróxido de hidrogênio para reprimir a atividade da peroxidase endógena.
• É aplicado um anticorpo primário específico, fornecido pelo usuário.
• O reagente de ligação IgG pós-primário localiza anticorpos de ratinho.
• O reagente polimérico HRP IgG localiza anticorpos de coelho.
• O cromogênio de substrato, 3,3'-Diaminobenzidina tetrahidrocloreto hidrato ou DAB, visualiza o complexo através de um precipitado
castanho.
• A contra-coloração com hematoxilina (azul) permite a visualização de núcleos celulares.
A utilização do produto BOND Polymer Refine Detection junto com o sistema automatizado BOND reduz a possibilidade de erros
humanos e a inerente variabilidade resultante da diluição individual de reagentes, da pipetagem manual e da aplicação manual de
reagentes.
Reagentes Fornecidos
Reagentes suficientes para 200 a 300 testes
1. Peroxide Block (30 mL) peróxido de hidrogênio a 3–4% (v/v).
2. Post Primary (30 mL) IgG de coelho anti-ratinho (<10 μg/mL) em soro animal a 10% (v/v) em solução salina tamponada com Tris/
ProClin™ 950 a 0,1%.
3. Polymer (30 mL) Poly-HRP-IgG anti-coelho (<25 μg/mL) contendo soro animal a 10% (v/v) em solução salina tamponada com Tris/
ProClin™ 950 a 0,1%.
4. DAB Part 1 (2.4 mL) 66 mM 3,3'-Diaminobenzidina tetrahidrocloreto hidrato em solução estabilizadora.
5. DAB Part B (30 mL) de peróxido de hidrogênio a ≤0,1% (v/v) em solução estabilizadora.
6. DAB Part B (30 mL) de peróxido de hidrogênio a ≤0,1% (v/v) em solução estabilizadora.
7. Hematoxylin (30 mL) hematoxilina a <0,1%.
Diluição e Mistura
BOND Polymer Refine Detection está otimizado para utilização no sistema BOND. Não é necessário fazer a reconstituição, mistura,
diluição ou titulação de esses reagentes.
Materiais Necessários Mas Não Fornecidos
Consulte a secção "Como usar reagentes BOND", incluída na documentação do usuário de sistemas BOND, para verificar uma lista
completa de materiais necessários para o tratamento e coloração imunohistoquímica de amostras usando o sistema BOND.
Armazenagem e Estabilidade
Armazenar a 2–8 ºC. Não congelar. Não usar após o prazo de validade indicado no rótulo do manípulo do tabuleiro.
Colocar a uma temperatura de 2–8 ºC logo após a utilização.
Não há sinais óbvios que indicam a instabilidade de este produto, portanto devem se executar controles positivos e negativos
simultaneamente com as amostras desconhecidas (consulte a secção "Controle da qualidade" na secção "Como usar reagentes BOND"
na sua documentação de usuário de BOND).
Em caso de observar uma coloração inesperada que não possa ser explicada por variações nos procedimentos de laboratório, e em
caso de suspeitar da presença de problemas no sistema de detecção, contate imediatamente seu distribuidor local ou o escritório
regional de Leica Biosystems.
As condições de armazenamento diferentes das que estão especificadas em cima devem ser verificadas pelo usuário .
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