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14.3.3 Réactif de contrôle négatif pour l'IHC
Utilisez un réactif de contrôle négatif pour l'IHC à la place de l'anticorps primaire avec une coupe de chaque
échantillon du patient pour évaluer la coloration non spécifique et permettre une meilleure interprétation de la
coloration spécifique.
Réactif de contrôle idéal recommandé
l
Pour les anticorps monoclonaux, utilisez un anticorps du même isotype que celui produit depuis le
a
surnageant de culture de tissu et de la même façon que l'anticorps primaire, mais ne présentant
aucune réactivité spécifique avec les tissus humains.
Diluez cette solution à la même concentration de protéine ou d'immunoglobuline que l'anticorps
primaire avec un diluant identique (Primary Antibody Diluent [diluant pour anticorps primaire BOND).
En cas de rétention de sérum de veau fœtal dans l'anticorps net après traitement, le sérum de veau
fœtal à une concentration en protéine équivalente à celle de l'anticorps primaire dilué dans le même
diluant peut aussi être utilisé.
b
Pour les anticorps polyclonaux, utilisez une fraction immunoglobuline (ou le sérum total le cas
échéant) de sérum normal ou non immunisé provenant de la même source animale et à la même
concentration en protéine que l'anticorps primaire, avec un diluant identique (BOND Primary Antibody
Diluent [diluant pour anticorps primaire Bond]).
Il est aussi possible d'utiliser du BOND Primary Antibody Diluent (diluant pour anticorps primaire Bond) seul
l
pour les réactifs de contrôles négatifs décrits précédemment, mais ce n'est pas la méthode à privilégier.
La période d'incubation du réactif de contrôle négatif doit correspondre à celle de l'anticorps primaire.
l
Utilisez une lame de contrôle négatif pour chaque méthode de démasquage employée (y compris l'absence de
l
démasquage) pour un anticorps primaire.
En cas d'utilisation de panels de plusieurs anticorps sur des coupes en série, les zones de coloration négative
l
d'une lame peuvent servir de contrôles de matrice de liaison négatif/non spécifique pour d'autres anticorps.
Pour différencier l'activité enzymatique endogène de la liaison non spécifique d'enzymes par rapport à
l
l'immunoréactivité spécifique, marquez des tissus supplémentaires du patient exclusivement avec des
chromogènes de substrat ou des complexes d'enzymes et des chromogènes de substrat, respectivement.
Le système BOND comprend un contrôle négatif par défaut pour l'IHC appelé « *Negative », pouvant être
l
sélectionné comme le marqueur dans tout protocole d'IHC. Il distribue du BOND Wash (voir
de cas et de
lame).
Système BOND Manuel d'utilisation BOND 7, 49.7556.510 A04
Droits d'auteur © 2023 Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd
Chapitre 14 Utilisation des réactifs BOND
10.5.2 Paramètres
352
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