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Ordre
Protocole (ou sonde)
8
Coloration
Les protocoles sélectionnés pour les séquences de protocoles peuvent être prédéfinis ou vous pouvez créer des
protocoles personnalisés et les sélectionner (voir
7.1.2.1
Protocoles et séquences de protocole pour la coloration multiplex
séquentielle
Les colorations multiplex séquentielles exécutent essentiellement deux séquences de protocole de coloration, l'une
après l'autre. Il peut s'agir d'une combinaison de protocoles IHC et/ou de protocoles ISH. Généralement, mais pas
dans tous les cas, le premier marqueur utilise le BOND Polymer Refine Detection System, avec chromogène DAB, et le
second marqueur utilise le BOND Polymer Refine Red Detection System, avec chromogène Fast Red.
Souvent, certains protocoles de la séquence appliquant le deuxième marqueur peuvent être ignorés ou s'ils sont
inclus, doivent être modifiés. Les étapes des protocoles de coloration pour les premier et deuxième marqueurs
doivent aussi généralement être modifiées (les protocoles requièrent des modifications pour avoir la bonne méthode
de coloration – voir
7.1.1 Modes de
protocole pour la coloration multiplex séquentielle figurent ci-dessous. Dans tous les cas, vous devez effectuer vos
propres tests pour vérifier les résultats.
Les protocoles de préparation (par ex., déparaffinage) ne peuvent être exécutés que dans la séquence du
l
premier marqueur. Le logiciel ne permet pas de sélectionner un protocole de préparation pour la deuxième
séquence du protocole de coloration.
Il est possible que le démasquage d'épitope ne soit nécessaire qu'une seule fois, avant l'application du premier
l
marqueur. Si un démasquage supplémentaire est nécessaire pour le deuxième marqueur, une durée plus
courte ou une température inférieure peut être adéquate.
Dans le cas d'une coloration multiplex avec deux sondes, une dénaturation n'est souvent nécessaire qu'une
l
seule fois, avant l'application du premier marqueur. Si une dénaturation supplémentaire est requise pour le
deuxième marqueur, elle requiert généralement une durée plus courte.
Pour les protocoles de coloration, les résultats sont généralement meilleurs si le segment de contremarquage
l
(par ex. hématoxyline) est supprimé de la fin du premier protocole. Il sera conservé pour le deuxième
protocole.
Système BOND Manuel d'utilisation BOND 7, 49.7556.510 A04
Droits d'auteur © 2023 Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd
IHC ou
ISH
Les
deux
Chapitre: 7.3: Création de
coloration). Des suggestions de modifications du protocole et de la séquence de
Chapitre 7 Protocoles (sur le contrôleur BOND)
Commentaire
Protocole requis pour l'application de chromogène et
des réactifs associés. Les IHC primaires sont
distribués dans ce protocole.
protocoles).
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