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14.2.4 Récupération des épitopes
La fixation du tissu au formol entraîne une réticulation entre les groupes aldéhyde et aminé dans le tissu. La
formation de ces liaisons peut se traduire par une perte variable d'antigénicité due à un effet de masquage. Le formol
crée des ponts méthylène qui peuvent modifier la forme tridimensionnelle globale de l'épitope. Certains épitopes sont
sensibles au formol et présentent une immunoréactivité réduite après la fixation au formol alors que d'autres sont
résistants au formol.
Les acides nucléiques étant entourés de protéines, une perméabilisation du tissu est nécessaire pour rendre les
séquences cibles accessibles à la sonde.
Le démasquage des épitopes
chaleur, par un prétraitement enzymatique, ou en associant les deux méthodes. HIER est la méthode de démasquage
d'épitope la plus largement utilisée pour l'IHC. Le mécanisme de la technique HIER n'est pas parfaitement compris.
L'hypothèse avancée est que le chauffage de la coupe à une température élevée dans une solution de démasquage
d'épitope hydrolyse la réticulation formée lors de la fixation au formol. Il en résulte une remodification de l'épitope qui
peut alors être marqué par immunohistochimie. Les facteurs importants dans la technique HIER sont la température,
la durée et le pH de la solution de démasquage. Il existe deux solutions de démasquage d'épitope différentes à utiliser
sur le système BOND : un tampon à base de citrate et un tampon à base d'EDTA.
Le prétraitement enzymatique utilise des enzymes protéolytiques pour rompre les liaisons peptidiques et révéler
l'épitope ou la séquence d'acide nucléique cible. La concentration d'enzymes et la durée d'incubation sont
proportionnelles à la durée de fixation de l'échantillon et doivent être optimisées en conséquence. Le prétraitement
enzymatique n'est adapté qu'à certains épitopes, mais se retrouve fréquemment dans les protocoles d'ISH.
14.3 Contrôle qualité
Des différences dans le traitement du tissu et les techniques employées par le laboratoire de l'utilisateur peuvent
entraîner une variabilité importante des résultats, nécessitant d'effectuer régulièrement des contrôles internes en plus
des procédures qui suivent. Vous pourrez également consulter utilement l'ouvrage intitulé : « CLIA Compliance
Handbook: The Essential Guide for the Clinical Laboratory Second Edition »
avancées par la NCCLS pour l'immunohistochimie
Les contrôles doivent être des échantillons frais obtenus par autopsie, biopsie ou chirurgie, fixés,
traités et inclus dans la paraffine dès que possible, en procédant de la même manière que pour les
échantillons du patient. Un tel contrôle permet de valider toutes les opérations de l'analyse, depuis la
préparation des tissus jusqu'à la coloration.
Nous recommandons vivement de placer le tissu de contrôle sur les mêmes lames que le tissu du
patient. Voir
Système BOND Manuel d'utilisation BOND 7, 49.7556.510 A04
Droits d'auteur © 2023 Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd
7 ,8
peut être obtenu par la technique HIER de démasquage d'épitope induit par la
14
.
6.2 Utilisation des contrôles
22
ainsi que les recommandations
pour une discussion plus approfondie.
Chapitre 14 Utilisation des réactifs BOND
349
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