Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 266

PROCEDURA
Prepararea panelurilor
1. Scoateți panelurile care trebuie utilizate din spațiul de păstrare. Nu utilizați dacă integritatea ambalajului este compromisă
(este desigilat, perforat sau rupt).
2. Tăiați punga și scoateți panelul. Dacă este păstrat în frigider, scoateți imediat panelul din punga de folie.
3. Panelurile nu trebuie utilizate în oricare dintre următoarele situații:
A. Desicantul nu este prezent sau este rupt.
B. Godeurile din paneluri sunt decolorate (de exemplu, PHO, diferite substanțe antimicrobiene).
4. Permiteți panelurilor să ajungă la temperatura camerei înainte de rehidratare. Panelurile pot fi stivuite cu o tavă de acoperire
curată pe partea de sus. Toate panelurile deschise trebuie folosite în aceeași zi sau aruncate.
Prepararea inoculului
CLSI recomandă verificarea periodică a densităților de inocul prin numărători de colonii. Pentru recomandări privind numărătorile de
colonii, consultați documentul CLSI M07-A10. Rezultatele preconizate pentru E. coli ATCC 25922 ar trebui să aproximeze îndeaproape
valoarea 5 x 10 CFU/ml pentru concentrațiile finale de testare.
5
în special cu metode manuale care sunt dependente de tehnică, cum ar fi sistemul Prompt sau inoculul preparat fără ajutorul unui
dispozitiv fotometric.
Observație: tehnicile logaritmice și de fază staționară nu sunt acceptate de produsele MicroScan.
1. Tehnica bazată pe standardul de turbiditate – Metoda primară de inoculare
Tehnica de turbiditate standard este recomandată pentru inocularea directă a tuturor cocilor aerobi Gram-pozitivi sau pentru
detectarea stafilococilor rezistenți la meticilină.
A. Folosind un bețișor, o buclă sau un tampon aplicator steril, atingeți suprafața a 4–5 colonii mari sau 5–10 colonii mici
similare din punct de vedere morfologic, bine izolate, dintr-o placă de agar neinhibitoare de 18–24 ore.
B. Emulsifiați în 3 ml de apă pentru inocul (apă deionizată în autoclavă).
C. Strângeți bine capacul și amestecați suspensia prin turbionare timp de 2–3 secunde. Turbiditatea finală trebuie să fie
echivalentă cu cea a unui standard de turbiditate McFarland 0,5. O turbiditate echivalentă poate fi realizată folosind un
turbidimetru MicroScan cu un interval de 0,08 ± 0,02.
D. Pipetați 0,1 ml (100 μl) din suspensia standardizată în 25 ml de apă pentru inocul cu PLURONIC. Strângeți bine capacul.
Răsturnați de 8–10 ori pentru amestecare.
2. Sistemul Prompt
Sistemul Prompt poate fi utilizat pentru cocii Gram-pozitivi care cresc mai rapid. Pentru a utiliza corect sistemul Prompt,
consultați documentul Prompt Inoculation Procedural Manual (Manual de proceduri de inoculare Prompt).
Observație: a se utiliza cu atenție. În cazul organismelor care nu îndeplinesc cerințele privind dimensiunea, poate apărea
sub-inocularea, ceea ca poate duce la o susceptibilitate incorectă și identificarea greșită a rezultatelor testului. În plus, numărul
de colonii de stafilococi poate fi ridicat în cazul metodei Prompt și poate fi mai mare decât intervalul anticipat de CLSI. Numărul
mare de colonii poate afecta grav rezultatele privind antibioticele influențate de inocul. Consultați secțiunea Limitări, pentru a
vedea substanțele antimicrobiene recunoscute ca fiind dependente de inocul.
Rehidratarea/inocularea panelurilor
Rehidratarea și inocularea sunt efectuate cu sistemele RENOK cu seturi Inoculator-D (B1013-4). Pentru folosi sistemul, consultați
RENOK Operator's Manual (Manualul de utilizare RENOK). Dacă se utilizează un alt sistem, rehidratați cu 115 ±10 μl de apă pentru
inocul (PLURONIC). Trebuie realizată o concentrație finală a godeului de 3–7 x 10
organismului testat, trebuie pregătită o placă de puritate prin strecurarea inoculului pe o placă de agar adecvată și incubarea în
condiții adecvate. Dacă pe placa de puritate sunt prezente două sau mai multe tipuri de colonii, reizolați coloniile și retestați-le.
Acoperirile biochimice
1. Folosind un flacon cu picurător, aplicați în godeurile de ARG și URE cu cel puțin 3 picături de ulei mineral. (Aceste godeuri
sunt subliniate pe panel.)
2. Mediile din godeuri trebuie să fie complet acoperite cu ulei mineral, însă uleiul nu trebuie să se reverse din godeuri.
OBSERVAȚIE: instrumentele WalkAway SI și WalkAway plus (și instrumente WalkAway modernizate cu funcția de aplicare
automată a uleiului) adaugă automat ulei în godeurile corespunzătoare.
Incubarea
1. Panelurile pot fi incubate într-un sistem WalkAway sau incubate off-line folosindu-se următoarele etape:
A. Pentru a asigura o distribuție termică uniformă în timpul incubării, stivuiți panelurile în grupuri de 3–5.
C29870–AD
Utilizatorul trebuie să acorde o atenție deosebită preparării inoculului,
1
CFU/ml. Pentru a asigura viabilitatea și puritatea
5
266 of 339