Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 179

POSTUP
Príprava panela
1. Vyberte z úložného priestoru panely, ktoré sa budú používať. Nepoužívajte ich, ak je porušená integrita obalu (netesný,
prepichnutý alebo natrhnutý).
2. Prerežte vrecko a vyberte panel. Ak panely skladujete v chladničke, ihneď vyberte panel z fóliového vrecka.
3. Panely by sa nemali používať, ak nastala ktorákoľvek z nasledujúcich podmienok:
A. Vysušovací prostriedok nie je prítomný alebo je porušený.
B. Jamky panela sú bezfarebné (napr. PHO, rozlične antimikrobiálne látky).
4. Pred rehydratáciou nechajte panely vytemperovať na teplotu miestnosti. Panely možno ukladať na seba a vrchný prikryť
čistou krycou táckou. Všetky otvorené panely by sa mali buď použiť v rovnaký deň alebo vyhodiť.
Príprava inokula
CLSI odporúča pravidelne kontrolovať hustotu očkovacej látky počítaním kolónií. Odporúčania k počítaniu kolónií nájdete
v dokumente CLSI M07-A10. Očakávané výsledky finálnych testovacích koncentrácií pre E. coli ATCC 25922 by mali byť
blízke hodnote 5 x 10 5 CFU/ml.
metódach, ktoré závisia od techniky, napríklad systém Prompt alebo príprava očkovacej látky bez pomoci fotometrického
zariadenia.
Poznámka: Produkty MicroScan nepodporujú postupy v logaritmickej a stacionárnej fáze.
1. Technika turbiditného štandardu – metóda primárneho očkovania
Na priame očkovanie všetkých aeróbnych gram-pozitívnych kokov alebo zisťovanie stafylokokov rezistentných voči
meticilínu sa odporúča technika štandardu turbidity.
A. Pomocou sterilnej aplikačnej tyčinky, očka alebo tampóna sa dotknite povrchu 4 – 5 veľkých alebo 5 – 10 malých,
morfologicky podobných, dobre oddelených kolónií z 18 – 24-hodinovej neinhibičnej agarovej platničky.
B. Emulzifikujte v 3 ml očkovacej vody (autoklávovaná deionizovaná voda).
C. Dôkladne zatiahnite a vortexujte suspenziu 2 – 3 sekundy. Konečná turbidita by mala zodpovedať štandardu
turbidity McFarland 0,5. Ekvivalentnú turbiditu možno dosiahnuť pomocou turbidimetra MicroScan s rozsahom
0,08 ± 0,02.
D. Napipetujte 0,1 ml (100 μl) štandardizovanej suspenzie do 25 ml očkovacej vody s činidlom PLURONIC. Dôkladne
uzavrite. Premiešajte 8 – 10-násobným prevrátením.
2. Systém Prompt
Systém Prompt sa môže použiť na rýchlejšie rastúce gram-pozitívne koky. Správne používanie systému Prompt je
opísané v dokumente Prompt Inoculation Procedural Manual (Príručka s postupmi očkovania k systému Prompt).
Poznámka: Používajte opatrne. Nedostatočné očkovanie sa môže vyskytnúť u organizmov, ktoré nespĺňajú požadovanú
veľkosť a môžu spôsobiť nesprávnosť výsledkov testovania citlivosti a identifikácie. Použitie metódy Prompt môže
navyše zvýšiť počty kolónií u druhov rodu Staphylococcus a tie môžu byť väčšie ako je očakávaný rozsah CLSI. Zvýšené
počty kolónií môžu mať negatívny dopad na výsledky antibiotík, na ktoré má vplyv očkovacia látka. Pozrite si časť
Obmedzenia pre antimikrobiálne látky, o ktorých je známe, že závisia od očkovacej látky.
Rehydratácia/očkovanie panela
Rehydratácia a očkovanie sa vykonávajú pomocou systému RENOK s očkovacími látkami Inoculators-D (B1013-4).
Postupujte podľa dokumentu RENOK Operator's Manual (Návod na obsluhu systému RENOK). Ak sa používa alternatívny
systém, vykonajte rehydratáciu pomocou 115 ± 10 μl očkovacej vody (PLURONIC). V jamke by mala byť finálna koncentrácia
3 – 7 x 10 CFU/ml. Aby sa zabezpečila životaschopnosť a čistota testovaného organizmu, mala by sa pripraviť miska
5
s testom čistoty pomocou výsevu očkovacej látky na vhodnú agarovú misku a inkubácie vo vhodných podmienkach. Ak sa
na miske s testom čistoty nachádzajú dva alebo viac typov kolónií, izolujte kolónie a opakovane otestujte.
Biochemické prevrstvenia
1. Pomocou fľaštičky s kvapkadlom prekryte jamky s ARG a URE najmenej 3 kvapkami minerálneho oleja. (Tieto jamky sú
podčiarknuté na paneli.)
2. Médiá v jamkách musia byť úplne prekryté minerálnym olejom, ale olej by nemal pretekať cez okraje jamiek.
POZNÁMKA: Prístroje WalkAway SI a WalkAway plus (a prístroj WalkAway s pridanou funkciou automatizovaného
prekrytia olejom) automaticky pridávajú olej do príslušných jamiek.
Inkubácia
1. Panely možno inkubovať v systéme WalkAway alebo inkubovať off-line podľa nasledujúcich krokov:
A. Aby sa zabezpečilo rovnomerné rozloženie tepla počas inkubácie, naskladajte na seba panely po 3 – 5 kusov.
C29870–AD
1 Používateľ by mal venovať veľkú pozornosť príprave očkovacej látky hlavne pri manuálnych
179 of 339