Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 165

POSTUP
Příprava panelu
1. Vyjměte panely, které chcete použít, ze skladovacího prostoru. Nepoužívejte je, pokud je obal poškozený (rozlepený,
proděravělý nebo roztržený).
2. Rozřízněte sáček a vyjměte panel. Pokud byl panel skladován v lednici, ihned ho vyjměte ze sáčku.
3. Panely by se neměly používat, pokud:
A. Není přítomno vysoušecí činidlo nebo je roztržené.
B. Jamky panelu změnily barvu (např. PHO, různá antimikrobika).
4. Před rehydratací nechte panely vytemperovat na pokojovou teplotu. Panely můžete skládat na sebe, na vrchním musí
být čistý kryt. Všechny otevřené panely by se měly zpracovat ve stejný den, jinak by se měly vyhodit.
Příprava inokula
CLSI doporučuje pravidelně kontrolovat hustotu inokula počítáním počtů buněk v kolonii. Doporučení pro počítání počtu buněk
v kolonii uvádí dokument CLSI M07-A10. Očekávané výsledky pro konečnou testovací koncentraci pro E. coli ATCC 25922
by se měly blížit 5×10 5 CFU/ml.
které jsou závislé na technice, jako je použití systému Prompt nebo příprava inokula bez pomoci fotometrického zařízení.
Poznámka: Produkty MicroScan nepodporují techniky logaritmické a stacionární fáze.
1. Standardní technika stanovení turbidity – metoda primárního inokula
Pro přímou inokulaci všech aerobních grampozitivních koků nebo pro detekci stafylokoků rezistentních na meticilin se
doporučuje standardní metoda stanovení turbidity.
A. Sterilním aplikátorem, kličkou nebo tamponem se dotkněte povrchu 4–5 velkých nebo 5–10 malých, morfologicky
podobných, dobře izolovaných kolonií z 18–24 hodin staré neinhibiční agarové misky.
B. Stěr emulzifikujte ve 3 ml inokulační vody (autoklávovaná deionizovaná voda).
C. Pevně uzavřete víčkem a vortexujte suspenzi po dobu 2–3 sekund. Konečná turbidita by měla být shodná
s McFarlandovým standardem zákalu stupně 0,5. Ekvivalentního zákalu lze dosáhnout pomocí turbidimetru
MicroScan s rozsahem 0,08 ± 0,02.
D. Napipetujte 0,1 ml (100 µl) standardizované suspenze do 25 ml inokulační vody s přípravkem PLURONIC. Pevně
uzavřete víčkem. Roztok 8–10krát převraťte, aby se promíchal.
2. Systém Prompt
Pro rychleji rostoucí grampozitivní koky je možné použít systém Prompt. Správné použití systému Prompt je popsáno
v dokumentu Prompt Inoculation Procedural Manual (Procesní příručka inokulačního systému Prompt).
Poznámka: používejte opatrně. V případě organismů, které nesplňují požadavek na velikost, může dojít k nedostatečné
inokulaci, která může vést k nesprávným výsledkům testů citlivosti a identifikace. Kromě toho může v případě metody
Prompt dojít ke zvýšení počtů buněk v kolonii stafylokoků a mohou překračovat očekávaný rozsah CLSI. Zvýšené počty
buněk v kolonii mohou nepříznivě ovlivnit výsledky antibiotik, které jsou ovlivněny inokulem. Informace o antimikrobicích,
která jsou známa jako závislá na inokulu, naleznete v oddílu Omezení.
Rehydratace/inokulace panelu
Rehydratace a inokulace se provádí pomocí systému RENOK s použitím sad Inoculator-D (B1013-4). Viz dokument RENOK
Operator's Manual for use (Návod k obsluze pro použití systému RENOK). Pokud používáte jiný systém, rehydratujte pomocí
115 ± 10 μl inokulační vody (PLURONIC). Konečná koncentrace v jamce by měla být 3–7 ×10
životaschopnost a čistota testovaného organismu, měla by se provádět kontrola čistoty kultury roztěrem inokula na misku
s vhodným agarem a inkubací za vhodných podmínek. Pokud se na misce pro kontrolu čistoty kultury nachází dva nebo více
typů kolonií, proveďte reizolaci kolonií a test zopakujte.
Biochemické převrstvení
1. Pomocí lahvičky s kapátkem převrstvěte jamky ARG a URE alespoň 3 kapkami minerálního oleje. (Tyto jamky jsou na
panelu podtržené.)
2. Médium v jamkách musí být zcela překryto minerálním olejem, ale olej nesmí z jamek přetékat.
POZNÁMKA: Přístroje WalkAway SI a WalkAway plus (a přístroje WalkAway upgradované přidáním funkce
automatického převrstvení olejem) automaticky přidají olej do příslušných jamek.
Inkubace
1. Panely se mohou inkubovat v systému WalkAway nebo mimo přístroj podle následujících kroků:
A. Aby byla zajištěna rovnoměrná distribuce tepla během inkubace, naskládejte panely na sebe ve skupinách po 3–5.
C29870–AD
1 Uživatel by měl věnovat zvláštní pozornost přípravě inokula, obzvláště u manuálních metod,
165 of 339
CFU/ml. Aby byla zaručena
5