Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 121

PROCEDŪRA
Plokštelių paruošimas
1. Išimkite naudojamas plokšteles iš saugyklos. Nenaudokite, jei pažeistas pakuotės vientisumas (pakuotė atidaryta,
pradurta arba suplėšyta).
2. Perpjaukite maišelį ir išimkite plokštelę. Jei laikoma šaldytuve, plokštelę tuoj pat išimkite iš folijos maišelio.
3. Plokštelės neturi būti naudojamos, jei tenkinama bet kuri toliau pateiktų sąlygų.
A. Džioviklio nėra arba jis sulūžęs.
B. Išblukę plokštelės šulinėliai (pvz., PHO, įvairios antimikrobinės medžiagos).
4. Prieš rehidratuodami, leiskite plokštelių temperatūrai susilyginti su kambario temperatūra. Plokštelės turi būti sudėtos
su švariu dengiamuoju dėklu ant viršaus. Visos atidarytos plokštelės turi būti sunaudotos tą pačią dieną arba išmestos.
Inokulianto paruošimas
CLSI rekomenduoja periodiškai tikrinti inokulianto tankius atliekant kolonijų skaičiavimus. Kolonijų skaičiavimo rekomendacijas
žr. CLSI dokumente M07-A10. Tikėtini E. coli ATCC 25922 rezultatai turi būti maždaug lygūs 5 x 10
koncentracijų. 1 Naudotojas turi kruopščiai paruošti inokuliantą, ypač naudodamas neautomatinius metodus, priklausančius
nuo technikos, pvz., „Prompt" sistemą arba inokuliantą, paruoštą nenaudojant fotometrinio prietaiso.
Pastaba: „MicroScan" gaminiuose negalima taikyti logaritminio augimo ir stacionarių fazių metodikos.
1. Drumstumo nustatymo standartinė metodika – pirminio inokulianto metodas
Drumstumo nustatymo standartinę techniką rekomenduojama naudoti atliekant tiesioginį visų aerobinių gramteigiamų
kokų inokuliavimą arba nustatant meticilinui atsparius stafilokokus.
A. Naudodami sterilią aplikatoriaus lazdelę, kilpelę arba tamponą, palieskite 4–5 didelių arba 5–10 mažų,
morfologiškai panašių gerai išskirtų kolonijų paviršių, kai kolonijos buvo 18–24 valandas augintos neslopinančio
agaro lėkštelėje.
B. Padarykite emulsiją 3 ml inokulianto vandens (apdorotas autoklave dejonizuotas vanduo).
C. Suspensiją sandariai uždarykite dangteliu ir maišykite sūkurinėje maišyklėje 2–3 sekundes. Galutinis drumstumas
turi būti lygus 0,5 McFarlando drumstumo standartui. Lygiavertį drumstumą galima gauti naudojant „MicroScan"
drumstumo matuoklį, kurio matavimo sritis yra 0,08 ± 0,02.
D. Pipete sulašinkite 0,1 ml (100 µl) standartizuotos suspensijos į 25 ml inokulianto vandens su PLURONIC. Sandariai
uždarykite dangteliu. 8–10 kartų apverskite, kad susimaišytų.
2. „Prompt" sistema
„Prompt" sistemą galima taikyti greičiau augantiems gramteigiamiems kokams. Informacijos apie tinkamą „Prompt"
sistemos naudojimą žr. „Prompt Inoculation Procedural Manual" („Prompt" inokuliavimo procedūrų vadove).
Pastaba: naudokite atsargiai. Nepakankamas inokuliavimas gali įvykti tada, kai mikroorganizmai neatitinka dydžio
reikalavimų, ir gali sukelti klaidingus jautrumo arba identifikavimo tyrimo rezultatus. Be to, taikant „Prompt" metodą,
stafilokokų kolonijų skaičius gali būti padidėjęs ir viršyti CLSI numatomą diapazoną.
gali neigiamai įtakoti antibiotikų rezultatus, kuriuos paveikia inokuliantas.
priklausomybė nuo inokulianto yra žinoma, žr. skyriuje „Ribojimai".
Plokštelių rehidratavimas / inokuliavimas
Rehidratavimas ir inokuliavimas atliekami naudojant RENOK sistemą su įtaisais „Inoculator-D" (B1013-4). Žr. „RENOK
Operator's Manual" (RENOK naudojimo instrukciją). Jei naudojama kita sistema, rehidratuokite 115 ± 10 µl inokulianto
vandens (PLURONIC). Turi būti pasiekta galutinė 3–7 × 10
mikroorganizmo gyvybingumą ir grynumą, reikia paruošti grynumo patikrinimo lėkštelę, užsėjant inokuliantą atitinkamo
agaro lėkštelėje ir inkubuojant atitinkamomis sąlygomis. Jei grynumo patvirtinimo lėkštelėje yra du ar daugiau kolonijų tipų,
kolonijas pakartotinai išskirkite ir ištirkite.
Biocheminiai padengimai
1. Naudodamiesi lašinamuoju buteliuku padenkite ARG ir URE šulinėlius bent 3 lašais mineralinės alyvos. (Šie šulinėliai
pabraukti plokštelėje.)
2. Šulinėlių terpė turi būti visiškai padengta mineraline alyva, tačiau alyva neturi išsilieti iš šulinėlių.
PASTABA: prietaisai „WalkAway SI" prietaisai ir „WalkAway plus" (bei prietaisai „WalkAway", atnaujinti įdiegiant
automatinio padengimo alyva funkciją) automatiškai įpila alyvos į atitinkamus šulinėlius.
Inkubavimas
1. Plokšteles galima inkubuoti „WalkAway" sistemoje arba inkubuoti autonominiu režimu, atlikus šiuos žingsnius:
A. Norėdami užtikrinti vienodą terminį pasiskirstymą, kai inkubuojama, sudėkite plokšteles grupėmis 3–5 plokšteles.
C29870–AD
CFU/ml šulinėlio koncentracija. Kad užtikrintumėte tiriamo
5
121 of 339
5 CFU/ml galutinių tyrimo
Didesnis kolonijų kiekis
Apie antimikrobines medžiagas, kurių