Siemens IMMULITE 2000 AntiCPP IgG Mode D'emploi page 26

L'epitopo per CCP è derivato da una
proteina precorritrice appartenente alle
filaggrine, un gruppo di proteine
di aggregazione dei filamenti.
Durante la fase finale della
differenziazione delle cellule epidermiche,
i residui di arginina nelle filaggrine sono
deiminati in citrullina. 5 Gli autoanticorpi
che hanno come target le sequenze di
peptidi contenenti citrullina nei principali
epitopi antigenici sono marker dell'artrite
reumatoide nei pazienti interessati.
Vari studi hanno dimostrato una sensibilità
del 41–89% e una specificità dell'89–99%
di Anti-CCP per la diagnosi di RA.
che gli anticorpi anti-proteina citrullinata
ciclica (ACPA) sono più specifici del
fattore reumatoide (RF), sono utilizzati
per distinguere le varie cause di artrite.
Principio della procedura
Il dosaggio IMMULITE 2000 Anti-CCP IgG
è un dosaggio immunometrico
sequenziale chemiluminescente a due cicli
in fase solida. La fase solida, una sferetta
in polistirene, è coattata con un antigene
peptide citrullinato ciclico (CCP). La fase
liquida è costituita da due reagenti:
1) tampone proteico e 2) fosfatasi alcalina
(intestino bovino) coniugata con un
anticorpo monoclonale murino anti-IgG
umana in tampone.
Nel primo ciclo, il campione del paziente
e il tampone vengono messi in
incubazione insieme alla sferetta coattata
per 30 minuti. Durante questo periodo,
la IgG umana nel campione si lega al CCP
sulla sferetta. Il campione non legato è
quindi eliminato per lavaggio centrifugato.
Nel secondo ciclo, l'anticorpo anti-IgG
umana monoclonale murino coniugato
enzimatico è aggiunto alla provetta
originale di reazione per un'ulteriore
incubazione di 30 minuti. L'anticorpo anti-
IgG umana monoclonale murino coniugato
enzimatico si lega alla IgG Anti-CCP
immobilizzata sulla sferetta. L'enzima
coniugato non legato viene eliminato
tramite lavaggio per centrifugazione.
Infine, viene aggiunto il substrato
chemiluminescente alla provetta di
reazione contenente la sferetta per
la generazione di un segnale
chemiluminescente proporzionale
all'enzima legato.
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Cicli d'incubazione: 2 × 30 minuti
Tempo al primo risultato: 65 minuti
Raccolta dei campioni
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
I campioni emolizzati o grossolanamente
contaminati possono produrre
risultati erronei.
La centrifugazione dei campioni di siero
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prima che la coagulazione sia completa
può produrre fibrina. Per evitare risultati
errati dovuti alla presenza di fibrina,
assicurarsi che il processo
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Dato
di coagulazione sia completo prima
di centrifugare i campioni.
Alcuni campioni, in modo particolare quelli
di pazienti sottoposti a terapia con
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anticoagulanti, possono richiedere tempi
di coagulazione più lunghi.
Provette per il prelievo di sangue
di produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, tra cui gel o barriere fisiche,
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.
IMMULITE 2000 Anti-CCP IgG non è stato
verificato con tutte le possibili variazioni
di tipi di provette. Consultare la sezione
concernente i tipi di campione alternativi
per i dettagli sulle provette testate.
Volume richiesto: 5 µL di siero
o di plasma (EDTA e litio eparinizzato).
Dopo la prediluizione automatica, 10 µL
del campione diluito sono impiegati per
l'immunodosaggio.
Fattore automatico di pre-diluizione: 40
Conservazione: Siero per 2 giorni a
temperatura ambiente, 7 giorni a 2–8°C;
oppure a temperatura non superiore a
–20°C per un massimo di 12 mesi.
Plasma per 2 giorni a temperatura
ambiente, 7 giorni a 2–8°C; oppure a
temperatura non superiore a –20°C per un
massimo di 8 mesi.
Sottoponendo campioni di siero e plasma
a 4 cicli di congelamento/scongelamento
non sono state rilevate differenze
clinicamente significative.
Miscelare adeguatamente i campioni
scongelati e centrifugarli.
IMMULITE 2000 Anti-CCP IgG (PIL2KPI-15, 2022-02)
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