Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi page 8

• I campioni, pre e post fissazione, e tutti i materiali ad essi esposti, vanno maneggiati come oggetti potenzialmente in grado di
trasmettere infezioni e smaltiti con precauzione2. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare che i reagenti o i campioni
vengano a contatto con la pelle o le mucose. Se i reagenti o i campioni biologici vengono a contatto con aree sensibili, lavare
abbondantemente con acqua. Consultare un medico.
• Per lo smaltimento di eventuali componenti potenzialmente tossici consultare i regolamenti nazionali, regionali o locali.
• Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per evitare un aumento di colorazione aspecifica.
• Tempi di recupero o incubazione o temperature diversi da quelli specificati possono generare risultati erronei. Ogni eventuale
modifica deve essere validata dall'utente.
Istruzioni per l'uso
L'anticorpo primario PD-1 (CAL20) è stato sviluppato per l'uso nel sistema automatizzato BOND (include i sistemi Leica BOND-MAX
e Leica BOND-III ) in combinazione al BOND Polymer Refine Detection. Il protocollo di colorazione consigliato per l'anticorpo primario
PD-1 (CAL20) è l'IHC Protocol F. Per lo smascheramento dell'epitopo indotto da calore si consiglia l'uso della BOND Epitope Retrieval
Solution 2 (AR9640) per 20 minuti.
Risultati attesi
Tessuti normali
Il clone CAL20 rileva la proteina PD-1 nel citoplasma o nella membrana di una parte delle cellule immunitarie. È stata osservata
colorazione nelle cellule immunitarie presenti nella maggior parte dei tipi di tessuto e in modo particolare nei linfonodi, nelle tonsille, nella
milza e nel timo. È stata inoltre osservata colorazione nei macrofagi alveolari. (Numero complessivo di casi normali valutati = 135)
Tessuti neoplastici
Il clone CAL20 ha colorato 3 di 101 linfomi (compresi 2 di 6 linfomi angioimmunoblastici a cellule T, 1 di 55 linfomi diffusi a grandi cellule
B, 1 di 6 linfomi anaplastici a grandi cellule, 0 di 16 linfomi a cellule T, 0 di 7 linfomi di Hodgkin, 0 di 5 linfomi della zona marginale
extranodale a cellule B, 0 di 3 linfomi follicolari, 0 di 2 linfomi di Burkitt e 0 di 1 linfoma NAS) e 1 di 5 tumori della tiroide (compresi 1
di 1 carcinoma follicolare, 0 di 3 adenomi follicolari e 0 di 1 carcinoma papillare della tiroide). Non è stata rilevata alcuna colorazione
(a eccezione delle cellule immunitarie infiltranti) nei tumori del colon-retto (0 di 8) (compresi 0 di 6 adenocarcinomi e 0 di 2 adenomi),
nei tumori metastatici (0 di 5), nei tumori della mammella (0 di 5) (compresi 0 di 3 carcinomi duttali invasivi e 0 di 2 fibroadenomi), nei
carcinomi epatocellulari (0 di 4), nei tumori del cervello (0 di 4) (compresi 0 di 3 meningiomi e 0 di 1 astrocitoma), nei tumori del polmone
(0 di 4) (compresi 0 di 2 carcinomi a cellule squamose, 0 di 1 adenocarcinoma e 0 di 1 carcinoma a piccole cellule), nei tumori ovarici (0
di 3) (compresi 0 di 1 tumore a cellule della granulosa, 0 di 1 adenocarcinoma e 0 di 1 adenocarcinoma endometrioide), nei carcinomi
a cellule squamose dell'esofago (0 di 3), negli adenocarcinomi dello stomaco (0 di 3), nei tumori della ghiandola surrenale (0 di 2)
(compresi 0 di 1 adenoma corticale e 0 di 1 carcinoma adrenocorticale), nei carcinomi a cellule transizionali della vescica (0 di 2), nei
tumori ossei (0 di 2) (compresi 0 di 1 osteosarcoma e 0 di 1 condrosarcoma), nei carcinomi a cellule squamose della cervice (0 di 2),
negli adenocarcinomi endometriali (0 di 2), nei carcinomi a cellule chiare del rene (0 di 2), negli adenocarcinomi della prostata (0 di 2),
nei tumori della ghiandola salivare (0 di 2) (compresi 0 di 1 adenoma pleomorfico, 0 di 1 carcinoma adenoido-cistico), nei tumori della
pelle (0 di 2) (compresi 0 di 1 carcinoma a cellule squamose, 0 di 1 melanoma), nei seminomi (0 di 2), in un adenocarcinoma orale (0
di 1), in un adenocarcinoma pancreatico (0 di 1), in un carcinoma a cellule squamose della lingua e in un'iperplasia prostatica (numero
complessivo di casi esaminati = 169).
L'uso di PD-1 (CAL20) è consigliato per il rilevamento della proteina PD-1 in tessuti normali e neoplastici, in aggiunta
all'istopatologia convenzionale che si avvale di colorazioni istochimiche non immunologiche.
Limitazioni specifiche del prodotto
Il PD-1 (CAL20) è stato ottimizzato da Leica Biosystems per l'uso con il BOND Polymer Refine Detection e con i reagenti ausiliari
BOND. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell'interpretazione dei risultati
relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi previsti dal protocollo possono variare in base alle differenze di fissazione tissutale e
all'efficienza di potenziamento dell'antigene e, pertanto, devono essere definiti empiricamente. Durante l'ottimizzazione delle condizioni
di riconoscimento e dei tempi del protocollo occorre utilizzare controlli negativi del reagente.
Ricerca e risoluzione problemi
Per le azioni di rimedio consultare il riferimento bibliografico n. 3.
Se si notano colorazioni inusuali, informarne il distributore di zona o l'ufficio regionale Leica Biosystems.
Ulteriori informazioni
Ulteriori informazioni sull'immunocolorazione con i reagenti BOND, sotto le intestazioni Principio della procedura, Materiali necessari,
Preparazione del campione, Controllo qualità, Verifica del saggio, Interpretazione della colorazione, Legenda dei simboli sulle etichette e
Limitazioni generali, possono essere reperite in "Uso dei reagenti BOND" nella documentazione per l'utilizzatore BOND.
Bibliografia
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angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Data di pubblicazione
03 aprile 2020
PA0216
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