Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi page 45

• So vzorkami pred fixáciou a po nej a všetkými materiálmi, ktoré s nimi prišli do kontaktu, je nutné manipulovať ako s potenciálne
infekčnými a zlikvidovať ich pri dodržaní zodpovedajúcich bezpečnostných opatrní2. Činidlá nikdy nepipetujte ústami a zabráňte
kontaktu činidiel a vzoriek s kožou a sliznicami. Ak sa činidlá alebo vzorky dostanú do kontaktu s citlivými oblasťami, umyte ich
veľkým množstvom vody. Vyhľadajte lekársku pomoc.
• Likvidáciu prípadných potenciálne toxických súčastí definujú federálne, štátne alebo miestne predpisy.
• Minimalizujte mikrobiálnu kontamináciu činidiel. V opačnom prípade môže dôjsť k zvýšeniu nešpecifického zafarbenia.
• Nedodržanie predpísaných dôb záchytu, inkubačných dôb alebo teplôt môže viesť k nesprávnym výsledkom. Všetky takéto zmeny si
vyžadujú validáciu používateľom.
Návod na použitie
Primárna protilátka PD-1 (CAL20) bola vytvorená na použitie v automatizovanom systéme BOND (zahŕňa systémy Leica BOND-MAX a
Leica BOND-III) v kombinácii so systémom BOND Polymer Refine Detection. Odporúčaný protokol farbenia pre primárnu protilátku PD-1
(CAL20) je IHC Protocol F. Záchyt epitopov s tepelnou indukciou sa odporúča s použitím roztoku BOND Epitope Retrieval Solution 2
(AR9640) na 20 minút.
Očakávané výsledky
Normálne tkanivá
Klon CAL20 deteguje proteín PD-1 v cytoplazme/membráne časti imunitných buniek. Zafarbenie bolo pozorované v imunitných bunkách
vo väčšine typov tkanív, najmä v lymfatických uzlinách, mandliach, slezine a týmuse. Zafarbenie bolo takisto pozorované v alveolárnych
makrofágoch. (Celkový počet normálnych vyšetrených prípadov = 135)
Nádorové tkanivá
Klon CAL20 zafarbil 3/101 lymfómov (vrátane 2/6 angioimunoblastických T-bunkových lymfómov, 1/55 difúznych veľkobunkových
B-bunkových lymfómov, 1/6 anaplastických veľkobunkových lymfómov, 0/16 T-bunkových lymfómov, 0/7 Hodgkinových lymfómov, 0/5
extranodálnych B-bunkových lymfómov marginálnej zóny, 0/3 folikulárnych lymfómov, 0/2 Burkittových lymfómov a 0/1 lymfómu NOS) a
1/5 nádorov štítnej žľazy (vrátane 1/1 folikulárneho karcinómu, 0/3 folikulárnych adenómov a 0/1 papilárneho karcinómu štítnej žľazy).
Žiadne zafarbenie (okrem infiltrujúcich imunitných buniek) nebolo pozorované pri nádoroch čriev (0/8) (vrátane 0/6 adenokarcinómov
a 0/2 adenómov), metastatických nádoroch (0/5), nádoroch prsníka (0/5) (vrátane 0/3 invazívných duktálnych karcinómov a 0/2
fibroadenómov), hepatocelulárnych karcinómoch (0/4), nádoroch mozgu (0/4) (vrátane 0/3 meningiómov a 0/1 astrocytómu), nádoroch
pľúc (0/4) (vrátane 0/2 skvamocelulárnych karcinómov, 0/1 adenokarcinómu a 0/1 malobunkového karcinómu), nádoroch vaječníkov
(0/3) (vrátane 0/1 nádoru granulóznych buniek, 0/1 adenokarcinómu a 0/1 endometriálneho adenokarcinómu), skvamocelulárnych
karcinómoch pažeráka (0/3), adenokarcinómoch žalúdka (0/3), nádoroch nadobličiek (0/2) (vrátane 0/1 kortikálneho adenómu a 0/1
adrenokortikálneho karcinómu), karcinómoch močového mechúra z prechodných buniek (0/2), nádoroch kostí (0/2) (vrátane 0/1
osteosarkómu a 0/1 chondrosarkómu), skvamocelulárnych karcinómoch krčka maternice (0/2), endometriálnych adenokarcinómoch
(0/2), svetlobunkových karcinómoch obličiek (0/2), adenokarcinómoch prostaty (0/2), nádoroch slinnej žľazy (0/2) (vrátane 0/1
pleomorfného adenómu, 0/1 adenoidného cystického karcinómu), nádoroch kože (0/2) (vrátane 0/1 skvamocelulárneho karcinómu, 0/1
melanómu), seminómoch (0/2), adenokarcinóme ústnej dutiny (0/1), adenokarcinóme pankreasu (0/1), skvamocelulárnom karcinóme
jazyka a hyperplázii prostaty (celkový počet vyšetrených prípadov = 169)
PD-1 (CAL20) sa odporúča na detekciu proteínu PD-1 v normálnych a neoplastických tkanivách ako doplnok konvenčnej
histopatológie za použitia neimunologických histochemických farbení.
Špecifické obmedzenia pre tento výrobok
PD-1 (CAL20) bol v spoločnosti Leica Biosystems optimalizovaný na použitie so systémom BOND Polymer Refine Detection a
pomocnými činidlami BOND. Používatelia, ktorí sa odchýlia od odporúčaných testovacích postupov, musia akceptovať zodpovednosť za
interpretáciu výsledkov pacienta za týchto okolností. Časy podľa protokolu sa môžu líšiť z dôvodu odchýlok vo fixácii tkaniva a účinnosti
zvýraznenia antigénu a musia sa zistiť empiricky. Pri optimalizácii podmienok záchytu a časov podľa protokolov je potrebné použiť
negatívne kontroly činidlom.
Riešenie problémov
Pri náprave môže byť nápomocná referencia 3.
Neobvyklé zafarbenie ohláste miestnemu distribútorovi alebo regionálnej pobočke spoločnosti Leica Biosystems.
Ďalšie informácie
Ďalšie informácie o imunofarbení s činidlami BOND nájdete v častiach Princíp postupu, Požadované materiály, Príprava vzorky,
Kontrola kvality, Overenie testu, Interpretácia zafarbenia, Legenda k symbolom na označení a Všeobecné obmedzenia v používateľskej
dokumentácii k systému BOND „Používanie činidiel BOND".
Literatúra
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Wang C, Hillsamer P and Kim CH. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T
cell subsets. BMC Immunology. 2011; 12:53.
5. Roncador G, Garcia Verdes-Montenegro J, Tedoldi S et al. Expression of two markers of germinal center T cells (SAP and PD-1) in
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica 2007; 92:1059-1066.
6. Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaie MS et al. Programmed Death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Dátum vydania
03 apríl 2020
PA0216
Page 44