Probleemoplossing - Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi

• Specimens, vóór en na fixatie, en alle materiaal dat hieraan is blootgesteld, moeten worden behandeld als potentiële overdragers van
infecties en volgens de juiste voorzorgsmaatregelen worden verwerkt.2 Pipetteer reagentia nooit met de mond en vermijd contact van
de huid en slijmvliezen met reagentia of monsters. Indien reagentia of monsters in aanraking komen met gevoelige gebieden, moet u
deze wassen met een overvloedige hoeveelheid water. Raadpleeg een arts.
• Raadpleeg de nationale, regionale en plaatselijke voorschriften voor de afvoer van alle potentieel giftige stoffen.
• Minimaliseer de kans op microbiële contaminatie van reagentia omdat hierdoor de niet-specifieke kleuring kan toenemen.
• Andere hersteltijden, incubatietijden of temperaturen dan vermeld, kunnen onjuiste resultaten opleveren. Dergelijke wijzigingen
moeten door de gebruiker worden gevalideerd.
Gebruiksaanwijzing
PD-1 (CAL20) primair antilichaam is ontwikkeld voor gebruik op het geautomatiseerde BOND-systeem (waaronder het Leica BOND-
MAX-systeem en het Leica BOND-III-systeem) in combinatie met BOND Polymer Refine Detection. Het aanbevolen kleuringsprotocol
voor PD-1 (CAL20) primair antilichaam is IHC Protocol F. Warmte-geïnduceerd epitoopherstel wordt aanbevolen met gebruik van BOND
Epitope Retrieval Solution 2 (AR9640) gedurende 20 minuten.
Verwachte resultaten
Normale weefsels
Kloon CAL20 detecteerde het PD-1-eiwit in het cytoplasma of membraan van een deel van immuuncellen. Kleuring werd waargenomen
binnen immuuncellen in de meeste weefseltypen, en in het bijzonder in de lymfeklieren, amandelen, milt en thymusklier. Kleuring werd
ook waargenomen in alveolaire macrofagen. (Totaal aantal normale gevallen dat werd geëvalueerd = 135)
Tumorweefsels
Kloon CAL20 kleurde 3/101 lymfomen (waaronder 2/6 angioimmunoblastische T-cellymfomen, 1/55 diffuse grootcellige
B-cellymfomen, 1/6 anaplastische grootcellige lymfomen, 0/16 T-cellymfomen, 0/7 Hodgkin-lymfomen, 0/5 extra nodale marginale
zone B-cellymfomen, 0/3 folliculair lymfomen, 0/2 Burkitt-lymfomen en 0/1 lymfoom NOS) en 1/5 schildkliertumoren (waaronder 1/1
folliculair carcinoom, 0/3 folliculaire adenomen en 0/1 papillair schildkliercarcinoom). Er werd geen kleuring (anders dan infiltrerende
immuuncellen) waargenomen in darmtumoren (0/8) (waaronder 0/6 adenocarcinomen en 0/2 adenomen), gemetastaseerde tumoren
(0/5), borsttumoren (0/5) (waaronder 0/3 invasieve ductale carcinomen en 0/2 fibroadenomen), hepatocellulaire carcinomen (0/4),
hersentumoren (0/4) (waaronder 0/3 meningiomen en 0/1 astrocytoom), longtumoren (0/4) (waaronder 0/2 plaveiselcelcarcinomen, 0/1
adenocarcinoom en 0/1 kleincellige carcinoom), eierstoktumoren (0/3) (waaronder 0/1 granulosaceltumor, 0/1 adenocarcinoom en 0/1
endometrioïde carcinoom), plaveiselcelcarcinomen van de oesofagus (0/3), adenocarcinomen van de maag (0/3), bijnierkliertumoren
(0/2) (waaronder 0/1 schorsadenoom en 0/1 nierschorscarcinoom), overgangscelcarcinomen van de blaas (0/2), bottumoren (0/2)
(waaronder 0/1 osteosarcoom en 0/1 chondrosarcoom), plaveiselcelcarcinoom van de cervix (0/2), adenocarcinomen van het
endometrium (0/2), 'clear cell'-carcinomen van de nier (0/2), adenocarcinomen van de prostaat (0/2), speekselkliertumoren (0/2)
(waaronder 0/1 pleomorf adenoom, 0/1 adenoïde cystisch carcinoom), huidtumoren (0/2) (waaronder 0/1 plaveiselcelcarcinoom, 0/1
melanoom), seminoom (0/2), een oraal adenocarcinoom (0/1), een adenocarcinoom van de pancreas (0/1), een plaveiselcelcarcinoom
van de tong, en een prostaathyperplasie (totaal aantal beoordeelde gevallen = 169)
PD-1 (CAL20) wordt aanbevolen voor het detecteren van PD-1-eiwit in normaal en neoplastische weefsels, als aanvulling op
conventionele histopathologie waarbij niet-immunologische histochemische kleuringen worden gebruikt.
Productspecifieke beperkingen
PD-1 (CAL20) is door Leica Biosystems geoptimaliseerd voor gebruik met BOND Polymer Refine Detection en BOND-hulpreagentia.
Gebruikers die afwijken van de aanbevolen testprocedures moeten de verantwoordelijkheid aanvaarden voor de interpretatie van
patiëntenresultaten verkregen onder deze omstandigheden. Protocoltijden kunnen variëren door variatie in weefselfixatie en de
effectiviteit van antigeenversterking, en moeten empirisch worden bepaald. Bij het optimaliseren van de herstelcondities en de
protocoltijden moeten negatieve reagenscontroles worden gebruikt.

Probleemoplossing

Raadpleeg referentie 3 voor herstelacties.
Neem contact op met uw lokale distributeur of het regionale kantoor van Leica Biosystems om ongebruikelijke kleuring te melden.
Overige informatie
Meer informatie over immunokleuring met BOND-reagentia vindt u onder de titels Principle of the procedure (Principe van de procedure),
Materials required (Benodigde materialen), Specimen preparation (Monsterpreparatie), Quality control (Kwaliteitscontrole), Assay
verification (Verificatie van de assay), Interpretation of staining (Interpretatie van de kleuring), Key to symbols on labels (Verklaring van
symbolen op etiketten) en General limitations (Algemene beperkingen) in 'Using BOND Reagents' (BOND-reagentia gebruiken) in de
gebruikersdocumentatie van BOND.
Literatuurlijst
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Wang C, Hillsamer P and Kim CH. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T
cell subsets. BMC Immunology. 2011; 12:53.
5. Roncador G, Garcia Verdes-Montenegro J, Tedoldi S et al. Expression of two markers of germinal center T cells (SAP and PD-1) in
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica 2007; 92:1059-1066.
6. Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaie MS et al. Programmed Death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Datum uitgave
03 april 2020
PA0216
Page 22