Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi page 39

• Próbki przed i po utrwaleniu oraz wszelkie materiały narażone na kontakt z nimi należy traktować jak materiały potencjalnie zakaźne i
należy je utylizować z zachowaniem odpowiednich środków ostrożności2. Podczas pobierania pipetą nie wolno zasysać odczynników
ustami i należy unikać kontaktu odczynników i preparatów ze skórą oraz błonami śluzowymi. W razie kontaktu odczynników lub
próbek ze szczególnie narażonymi miejscami przemyć miejsce kontaktu dużą ilością wody. Należy zasięgnąć porady lekarza.
• Wszelkie potencjalnie toksyczne składniki należy utylizować zgodnie z krajowymi lub lokalnymi przepisami.
• Chronić odczynniki przed skażeniem drobnoustrojami, ponieważ może ono doprowadzić do zwiększonego barwienia niespecyficznego.
• Zastosowanie czasów odmaskowywania, inkubacji lub temperatur innych niż podano w instrukcji może spowodować błędne wyniki.
Wszelkie zmiany tego typu muszą zostać zweryfikowane przez użytkownika.
Instrukcja stosowania
Przeciwciało pierwszorzędowe PD-1 (CAL20) zostało opracowane z myślą o zastosowaniu w automatycznym systemie BOND
(obejmującym systemy Leica BOND-MAX i Leica BOND-III) w połączeniu z BOND Polymer Refine Detection. Zalecany protokół
barwienia dla przeciwciała pierwszorzędowego PD-1 (CAL20) to IHC Protocol F. Zaleca się cieplne odmaskowywanie epitopu przy
użyciu roztworu BOND Epitope Retrieval Solution 2 (AR9640) przez 20 minut.
Oczekiwane wyniki
Tkanki prawidłowe
Klon CAL20 wykrywa białko PD-1 w cytoplazmie/błonie niektórych komórek odpornościowych. Barwienie zaobserwowano w komórkach
układu odpornościowego w większości typów tkanek, a w szczególności w węzłach chłonnych, migdałkach, śledzionie i grasicy.
Barwienie stwierdzono również w makrofagach pęcherzykowych. (Łączna liczba ocenionych prawidłowych przypadków = 135).
Tkanki nowotworowe
Klon CAL20 wybarwił 3/101 chłoniaki (w tym 2/6 chłoniaki angioimmunoblastyczne z limfocytów T, 1/55 chłoniaka rozsianego z dużych
limfocytów B, 1/6 anaplastycznego chłoniaka wielkokomórkowego, 0/16 chłoniaków z limfocytów T, 0/7 chłoniaków Hodgkina, 0/5
pozawęzłowych chłoniaków strefy brzeżnej z limfocytów B, 0/3 chłoniaków grudkowych, 0/2 chłoniaków Burkitta i 0/1 chłoniaków bliżej
nieokreślonych) i 1/5 guza tarczycy (w tym 1/1 raka pęcherzykowego, 0/3 gruczolaków pęcherzykowych i 0/1 raków brodawkowatych
tarczycy). Nie wykryto barwienia (innego niż naciekające komórki odpornościowe) w przypadku guzów jelita (0/8) (w tym 0/6
gruczolakoraków i 0/2 gruczolaków), guzów przerzutowych (0/5), guzów sutka (0/5) (w tym 0/3 inwazyjnych raków przewodowych i 0/2
gruczolakowłókniaków), raków wątrobowokomórkowych (0/4), guzów mózgu (0/4) (w tym 0/3 oponiaków i 0/1 gwiaździaka), guzów
płuc (0/4) (w tym 0/2 raków płaskonabłonkowych, 0/1 gruczolakoraka i 0/1 raka drobnokomórkowego), guzów jajników (0/3) (w tym 0/1
ziarniszczaka, 0/1 gruczolakoraka i 0/1 gruczolakoraka endometrium), raków płaskonabłonkowych przełyku (0/3), gruczolakoraków
żołądka (0/3), guzów nadnerczy (0/2) (w tym 0/1 gruczolaka kory nadnerczy i 0/1 raka nadnerczy), raków przejściowokomórkowych
pęcherza moczowego (0/2), guzów kości (0/2) (w tym 0/1 kostniakomięsaka i 0/1 chrzęstniakomięsaka), raków płaskonabłonkowych
szyjki macicy (0/2), gruczolakoraków endometrium (0/2), raków jasnokomórkowych nerek (0/2), gruczolakoraków gruczołu krokowego
(0/2), guzów ślinianki (0/2) (w tym 0/1 gruczolaka wielopostaciowego, 0/1 raka torbielowatego), guzów skóry (0/2) (w tym 0/1
raka płaskonabłonkowego, 0/1 czerniaka), nasieniaków (0/2), gruczolakoraka jamy ustnej (0/1), gruczolaka trzustki (0/1), raka
płaskonabłonkowego języka i rozrostu gruczołu krokowego (Całkowita liczba ocenionych przypadków = 169)
Zaleca się stosowanie PD-1 (CAL20) do wykrywania białka PD-1 w tkankach zdrowych i rakowych, jako uzupełnienie
konwencjonalnego badania histopatologicznego opartego na nieimmunologicznym barwieniu histologicznym.
Szczególne ograniczenia dla produktu
Przeciwciało PD-1 (CAL20) zostało zoptymalizowane w Leica Biosystems pod kątem stosowania z BOND Polymer Refine Detection
i pomocniczymi odczynnikami BOND. W tych okolicznościach użytkownicy, którzy postępują niezgodnie z zalecanymi procedurami
testowymi muszą wziąć odpowiedzialność za interpretację wyników chorego. Czasy protokołu mogą być różne w związku ze
zróżnicowaniem w zakresie utrwalenia tkanek i skuteczności wzmocnienia przez przeciwciało i należy je określić doświadczalnie.
Odczynniki kontroli negatywnej należy stosować podczas optymalizacji warunków odmaskowywania i czasów protokołu.
Rozwiązywanie problemów
W celu uzyskania dalszych informacji o działaniu zaradczym zob. odsyłacz 3.
W celu zgłoszenia nietypowego barwienia należy skontaktować się z lokalnym dystrybutorem lub z regionalnym biurem firmy Leica
Biosystems.
Dodatkowe informacje
Dodatkowe informacje dotyczące immunobarwienia przy użyciu odczynników BOND opisanego w działach „Zasady postępowania",
„Wymagane materiały", „Przygotowanie próbek", „Kontrola Jakości", „Weryfikacja testu", „Interpretacja barwienia", „Objaśnienie symboli
na etykietach" i „Ograniczenia ogólne" można znaleźć w punkcie „Stosowanie odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika
systemu BOND.
Bibliografia
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Wang C, Hillsamer P and Kim CH. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T
cell subsets. BMC Immunology. 2011; 12:53.
5. Roncador G, Garcia Verdes-Montenegro J, Tedoldi S et al. Expression of two markers of germinal center T cells (SAP and PD-1) in
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica 2007; 92:1059-1066.
6. Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaie MS et al. Programmed Death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Data publikacji
03 kwietnia 2020
PA0216
Page 38