Fejlfinding - Leica BIOSYSTEMS BOND Mode D'emploi

• Prøver, før og efter fiksering, og alle materialer som udsættes for dem, skal behandles som om de kan overføre smitte og afskaffes
i henhold til de korrekte forholdsregler2. Foretag aldrig pipettering med munden, og undgå at kontakte følsomme områder og
slimhinder med reagenser eller prøver. Hvis reagenser eller prøver kommer i kontakt med følsomme områder, skal der skylles med
rigelige mængder vand. Søg lægehjælp.
• Bortskaffelse af potentielt toksiske komponenter skal ske i henhold til statslig eller lokal lovgivning.
• Mikrobiel kontamination af reagenser skal minimeres for at undgå en øget uspecifik farvning.
• Genfinding, inkubationstider eller temperaturer, der afviger fra de specificerede, kan give fejlagtige resultater. En eventuel sådan
ændring skal valideres af brugeren.
Brugsanvisning
PD-1 (CAL20) primært antistof er udviklet med henblik på brug i det automatiske BOND-system (omfatter Leica BOND-MAX-systemet
og Leica BOND-III-systemet) kombineret med BOND Polymer Refine Detection. Den anbefalede farvningsprotokol for PD-1 (CAL20)
primært antistof er IHC Protocol F. Varmefremkaldt epitophentning anbefales ved hjælp af BOND Epitope Retrieval Solution 2 (AR9640)
i 20 minutter.
Forventede resultater
Normalt væv
Clone CAL20 registrerer PD-1-proteinet i cytoplasmaen/membranen i en andel af immunceller. Farvning blev observeret i immunceller
i de fleste vævstyper og især i lymfeknuder, mandler, milt og thymuskirtel. Der blev også observeret farvning i alveolære makrofager.
(Samlet antal normale tilfælde, der blev evalueret = 135)
Tumorvæv
Clone CAL20-farvede 3/101 lymfomer (herunder 2/6 angioimmunoblastiske T-cellelymfomer, 1/55 diffuse store B-cellelymfomer,
1/6 anaplastiske store cellelymfomer, 0/16 T-cellelymfomer, 0/7 Hodgkin-lymfomer, 0/5 ekstra nodalmarginalzone B-cellelymfomer,
0/3 follikulære lymfomer, 0/2 Burkitt-lymfomer og 0/1 lymfom NOS) og 1/5 skjoldbruskkirteltumorer (herunder 1/1 follikulært
karcinom, 0/3 follikulære adenomer og 0/1 papillær skjoldbruskkirtelkarcinom). Der blev ikke påvist farvning (bortset fra infiltrerende
immunceller) i tarmtumorer (0/8) (herunder 0/6 adenokarcinomer og 0/2 adenomer), metastatiske tumorer (0/5), brysttumorer (0/5)
(herunder 0/3 invasivt duktalt karcinom og 0/2 fibroadenomer), hepatocellulære karcinomer (0/4), hjernetumorer (0/4) (herunder 0/3
meningiomas og 0/1 astrocytoma), lungetumorer (0/4) (herunder 0/2 pladecellekarcinomer, 0/1 adenokarcinom og 0/1 småcellet
karcinom), æggestoktumorer (0/3) (herunder 0/1 granulosacelletumor, 0/1 adenokarcinom g 0/1 endometrioid adenokarcinom),
pladecellekarcinomer i spiserøret (0/3), adenokarcinomer i maven (0/3), binyretumortumorer (0/2) (herunder 0/1 kortikalt adenom
og 0/1 adrenokortikalt karcinom), overgangscellekarcinomer i blæren (0/2), knogletumorer (0/2) (herunder 0/1 osteosarkom og
0/1 chondrosarkomer), pladecellekarcinomer i livmoderhalsen (0/2), endometrial adenokarcinomer (0/2), klare cellekarcinomer
i nyrerne (0/2), adenokarcinomer i prostata (0/2), spytkirteltumorer (0/2) (herunder 0/1 pleomorfadenom, 0/1 adenoid cystisk
karcinom), hudtumorer (0/2) (herunder 0/1 pladecellekarcinom, 0/1 melanom), seminomer (0/2), et oralt adenockarcinom (0/1), et
pancreasadenokarcinom (0/1), et pladecellekarcinom på tungen og en prostatahyperplasi (Samlet antal evaluerede tilfælde = 169)
PD-1-CAL20 anbefales til påvisning af humant PD-1-protein i normale og neoplastiske væv, som et hjælpemiddel til traditionel
histopatologi ved brug af ikke-immunologiske histokemiske farvninger.
Produktspecifikke begrænsninger
PD-1 (CAL20) er blevet optimeret hos Leica Biosystems til brug sammen med BOND Polymer Refine Detection og BOND-
hjælpereagenser. Brugere, som afviger fra anbefalede testprocedurer, må selv tage ansvaret for tolkningen af patientresultater under
disse betingelser. Protokoltiderne kan variere pga. variationer i vævsfiksering og effektiviteten af antigenforstærkningen og skal
bestemmes empirisk. Der skal anvendes negative reagenskontroller ved optimering af hentningsforhold og protokoltider.

Fejlfinding

Se reference 3 for afhjælpende handlinger.
Kontakt den lokale forhandler eller Leica Biosystems' regionale kontor for at rapportere usædvanlig farvning.
Yderligere oplysninger
Yderligere oplysninger om immunfarvning med BOND-reagenser kan findes under overskrifterne Procedureprincip, Nødvendige
materialer, klargøring af prøver, Kvalitetskontrol, Analyseverifikation, Tolkning af farvning, Nøgle til symboler på etiketter og Generelle
begrænsninger i "Anvendelse af BOND-reagenser" i brugerdokumentationen til BOND-systemet.
Litteraturliste
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Wang C, Hillsamer P and Kim CH. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T
cell subsets. BMC Immunology. 2011; 12:53.
5. Roncador G, Garcia Verdes-Montenegro J, Tedoldi S et al. Expression of two markers of germinal center T cells (SAP and PD-1) in
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica 2007; 92:1059-1066.
6. Dorfman DM, Brown JA, Shahsafaie MS et al. Programmed Death-1 (PD-1) is a marker of germinal center-associated T cells and
angioimmunoblastic T-cell lymphoma. American Journal of Surgical Pathology 2006; 30:802-810.
Udgivelsesdato
03 april 2020
PA0216
Page 20