Leica Novocastra Liquid Mode D'emploi page 61

Nedodržanie predpísaných inkubačných dôb alebo teplôt môže viesť k nesprávnym výsledkom. Všetky takéto zmeny si vyžadujú
validáciu používateľom.
Kontrola kvality
Rozdiely v spracovaní tkaniva a technických postupoch v laboratóriu používateľa môžu viesť k významnému kolísaniu výsledkov, čo si
vyžaduje, okrem nasledujúcich postupov, aj pravidelné interné kontroly.
Kontroly by mali byť čerstvé pitevné/bioptické/chirurgické vzorky fixované čo najskôr formalínom a spracované zaliatím do parafínu
rovnakým spôsobom ako vzorky pacienta.
Pozitívna kontrola tkanivom
Identifikuje správne pripravené tkanivá a správne techniky zafarbenia.
Každá súprava testových podmienok v každom cykle zafarbenia musí obsahovať jednu pozitívnu kontrolu tkanivom.
Tkanivo so slabým pozitívnym farbením je pre optimálnu kontrolu kvality a na detekciu slabšej degradácie činidla vhodnejšie než tkanivo
so silným pozitívnym farbením.
2
Odporúčané tkanivo na pozitívnu kontrolu je hrubé črevo.
Ak pozitívna kontrola tkanivom nebude vykazovať pozitívne zafarbenie, výsledky testovaných vzoriek je nutné považovať za neplatné.
Negatívna kontrola tkanivom
Nutné vyšetriť po pozitívnej kontrole tkanivom s cieľom overiť špecificitu značenia cieľového antigénu primárnou protilátkou.
Odporúčané tkanivo na negatívnu kontrolu je mozoček.
Ako negatívnu kontrolu je možné použiť aj rôzne typy buniek prítomné vo väčšine tkanivových rezov, takýto postup si však vyžaduje
validáciu používateľom.
Prípadné nešpecifické farbenie má obvykle difúzny vzhľad. V rezoch tkanív silne fixovaných formalínom môže byť pozorované
sporadické farbenie spojiva. Na interpretáciu výsledkov farbenia používajte intaktné bunky. Nekrotické alebo degenerované bunky
sa často farbia nešpecificky. Falošne pozitívne výsledky môžu byť pozorované v dôsledku neimunologickej väzby proteínov alebo
3
produktov reakcie substrátu. Môžu byť spôsobené aj endogénnymi enzýmami, ako napr. pseudoperoxidázou (erytrocyty), endogénnou
peroxidázou (cytochróm C) alebo endogénnym biotínom (napr. pečeň, prsník, mozog, oblička) v závislosti od typu imunologického
farbenia. S cieľom diferencovať endogénnu enzymatickú aktivitu alebo nešpecifickú väzbu enzýmov od špecifickej imunoreaktivity
môžete nafarbiť ďalšie vzorky tkanív pacienta výhradne substrátovým chromogénom alebo enzymatickými komplexmi (avidín-biotín,
streptavidín, značený polymér), resp. substrátovým chromogénom. V prípade špecifického farbenia v negatívnej kontrole tkanivom je
nutné výsledky vzoriek pacienta považovať za neplatné.
Negatívna kontrola činidlom
Na vyhodnotenie nešpecifického zafarbenia použite nešpecifickú negatívnu kontrolu činidlom miesto primárnej protilátky s rezom
jednotlivých vzoriek pacienta, čo umožní lepšiu interpretáciu špecifického farbenia na mieste antigénu.
Tkanivo pacienta
Pacientske vzorky zafarbené prípravkom NCL-L-CEA-609 preskúmajte ako posledné. Intenzitu pozitívneho farbenia je nutné vyhodnotiť
v kontexte prípadného
nešpecifického zafarbenia negatívnej kontroly činidlom na pozadí. Podobne ako pri všetkých imunohistochemických testov znamená
negatívny výsledok, že antigén nebol detegovaný. Nepotvrdzuje jeho absenciu v testovaných bunkách/tkanivách. V prípade potreby
identifikujte falošne negatívne reakcie pomocou panelu protilátok.
Očakávané výsledky
Normálne tkanivá
Klon COL-1 detegoval karcinoembryonálny antigén v epitelových bunkách hrubého čreva, konečníka, pažeráka a hrtana a v skvamóznej
sliznici krčka maternice. (Celkový počet normálnych prípadov = 150).
Abnormálne tkanivá
Klon COL-1 zafarbil 58/65 nádorov hrubého čreva (vrátane 20/23 metastatických adenokarcinómov, 18/22 adenokarcinómov, 6/6
adenómov, 5/5 polypov, 4/4 mucinóznych adenokarcinómov, 3/3 metastatických mucinóznych adenokarcinómov a 2/2 metastatických
karcinómov z buniek tvaru pečatného prsteňa), 33/77 nádorov pľúc (vrátane 14/28 adenokarcinómov, 12/28 skvamocelulárnych
karcinómov, 3/8 malobunkových karcinómov, 1/6 atypických karcinoidov, 1/3 veľkobunkových karcinómov, 1/2 metastatických
skvamocelulárnych karcinómov a 1/2 metastatických adenokarcinómov), 10/49 nádorov vaječníkov (vrátane 3/12 endometriálnych
adenokarcinómov, 3/3 mucinóznych adenokarcinómov, 2/6 seróznych papilárnych adenokarcinómov, 1/3 mucinóznych
cystadenokarcinómov, 1/3 mucinóznych cystadenómov, 0/5 seróznych adenokarcinómov, 0/4 nádorov tekálnych buniek, 0/3 nádorov z
granulárnych buniek, 0/3 nediferencovaných karcinómov, 0/2 karcinómov endodermálneho sínusu, 0/1 dysgerminómu, 0/1 nezrelého
teratómu, 0/1 leiomyosarkómu, 0/1 hraničného mucinózneho cystadenómu a 0/1 adenokarcinómu), 5/11 metastatických nádorov
(vrátane 3/4 metastatických karcinómov žalúdka, 2/4 metastatických karcinómov prsníka, 0/1 metastatického nazofaryngálneho
karcinómu, 0/1 metastatického adenokarcinómu štítnej žľazy a 0/1 metastatického skvamocelulárneho karcinómu pažeráka), 5/5
prípadov chronickej kolitídy, 4/4 prípadov Crohnovej choroby, 3/3 adenokarcinómov žalúdka, 2/2 nádorov tenkého čreva (vrátane 1/1
adenómu a 1/1 adenokarcinómu), 2/2 skvamocelulárnych karcinómov krčka maternice, 1/3 skvamocelulárnych karcinómov pažeráka,
1/2 adenokarcinómov endometria, 1/1 skvamocelulárneho karcinómu kože a 1/1 skvamocelulárneho karcinómu jazyka. Žiadne
zafarbenie nebolo pozorované pri nádoroch prsníka (0/5), nádoroch štítnej žľazy (0/5), nádoroch mozgu (0/4), hepatocelulárnych
karcinómoch (0/4), lymfómoch (0/3), nádoroch prostaty (0/2), nádoroch hlavy a krku (0/2), nádoroch nadobličiek (0/2), nádoroch
močového mechúra (0/2), nádoroch kostí (0/2), nádoroch slinnej žľazy (0/2), seminómoch (0/2), nádoroch obličiek (0/2), nádore
pakreasu (0/1), hyperplázii prostaty (0/1), melanóme (0/1), v prípade tuberkulózy hrubého čreva (0/1) ani pri feochromocytóme (0/1).
(Celkový počet abnormálnych prípadov = 267).
NCL-L-CEA-609 sa odporúča na detekciu karcinoembryonálneho antigénu v normálnych a neoplastických tkanivách ako
doplnok konvenčnej histopatológie pri použití neimunologických histochemických zafarbení.
CEA-609-L-CE
Page 60