Leica Novocastra Liquid Mode D'emploi page 58

Kontrola jakosti
Rozdíly ve zpracování tkání a v technických postupech v laboratoři uživatele mohou způsobit významnou variabilitu výsledků, což
vyžaduje kromě níže uvedených postupů i pravidelné provádění kontrol v laboratoři.
Kontroly musí být čerstvé pitevní/bioptické/operační vzorky co nejdříve fixované formalínem, zpracované a zalité do parafínového vosku,
stejným způsobem jako vzorek/vzorky pacienta.
Pozitivní tkáňová kontrola
Používá se k průkazu správně připravených tkání a správných barvicích technik.
V každém barvicím cyklu musí být použita jedna pozitivní tkáňová kontrola pro každý soubor testovacích podmínek.
Pro optimální kontrolu jakosti a k detekci menšího stupně degradace reagencie je vhodnější tkáň se slabým pozitivním barvením než
tkáň se silným pozitivním barvením.
2
Doporučenou pozitivní tkáňovou kontrolou je střevo.
Pokud pozitivní tkáňová kontrola nevykazuje pozitivní barvení, musí být výsledky testovaných vzorků považovány za neplatné.
Negativní tkáňová kontrola
Musí být vyšetřena po pozitivní tkáňové kontrole k ověření specificity označení cílového antigenu primární protilátkou.
Doporučená negativní tkáňová kontrola je mozeček.
Alternativně často představuje místa negativní kontroly řada různých typů buněk přítomných ve většině tkáňových řezů, to ale musí
uživatel validovat.
Nespecifické barvení, je-li přítomno, má obvykle difúzní vzhled. V řezech ze tkání nadměrně fixovaných formalínem může být také
zjištěno sporadické barvení pojivové tkáně. K interpretaci výsledků barvení použijte neporušené buňky. Nekrotické nebo degenerované
buňky se často barví nespecificky. Falešně pozitivní výsledky mohou být důsledkem neimunologické vazby proteinů nebo produktů
3
reakčního substrátu. Mohou být také způsobeny endogenními enzymy, jako je např. pseudoperoxidáza (erytrocyty), endogenní
peroxidáza (cytochrom C) nebo endogenní biotin (např. játra, prs, mozek, ledviny), podle typu použitého imunobarviva. K odlišení aktivity
endogenních enzymů či nespecifické vazby enzymů od specifické imunoreaktivity mohou být barveny další tkáně pacienta výlučně
chromogenním substrátem, případně enzymovými komplexy (avidin-biotin, streptavidin, značený polymer) a chromogenním substrátem.
Pokud dojde v negativní tkáňové kontrole ke specifickému barvení, musí být výsledky vzorků pacienta považovány za neplatné.
Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení v místě antigenu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta nespecifickou negativní reagenční kontrolu místo primární protilátky.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí NCL-L-CEA-609. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu
se vším nespecifickým barvením pozadí u negativní reagenční kontroly. Jako u každého imunohistochemického vyšetření, negativní
výsledek znamená, že antigen nebyl zjištěn, nikoli, že antigen není ve vyšetřovaných buňkách/tkáních přítomen. V případě potřeby
použijte k identifikaci falešně negativních reakcí panel protilátek.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Klon COL-1 detekoval karcinoembryonální antigen v epiteliálních buňkách tlustého střeva, rekta, jícnu a hrtanu a ve skvamózní sliznici
děložního hrdla. (Celkový počet normálních tkání = 150).
Abnormální tkáně
Klon COL-1 obarvil 58/65 vzorků nádoru tlustého střeva (včetně 20/23 metastatických adenokarcinomů, 18/22 adenokarcinomů, 6/6
adenomů, 5/5 polypů, 4/4 mucinózních adenokarcinomů, 3/3 metastatických mucinózních adenokarcinomů a 2/2 metastatických
karcinomů z prstencových buněk), 33/77 nádorů plic (včetně 14/28 adenokarcinomů, 12/28 karcinomů ze skvamózních buněk, 3/8
malobuněčných karcinomů, 1/6 atypických karcinoidních nádorů, 1/3 velkobuněčných karcinomů, 1/2 metastatických karcinomů ze
skvamózních buněk a 1/2 metastatických adenokarcinomů), 10/49 nádorů ovarií (včetně 3/12 endometrioidních adenokarcinomů, 3/3
mucinózních adenokarcinomů, 2/6 serózních papilárních adenokarcinomů, 1/3 mucinózních cystadenokarcinomů, 1/3 mucinózních
cystadenomů, 0/5 serózních adenokarcinomů, 0/4 nádorů z thekálních buněk, 0/3 nádorů z granulózních buněk, 0/3 nediferencovaných
karcinomů, 0/2 karcinomů endodermálního sinu, 0/1 dysgerminomu, 0/1 nezralého teratomu, 0/1 leiomyosarkomu, 0/1 borderline
mucinózního cystadenomu a 0/1 adenokarcinomu), 5/11 metastatických nádorů (včetně 3/4 metastatických karcinomů žaludku, 2/4
metastatických karcinomů prsu, 0/1 metastatického nasofaryngeálního karcinomu, 0/1 metastatického adenokarcinomu štítné žlázy a 0/1
metastatického karcinomu skvamózních buněk jícnu), 5/5 chronických kolitid, 4/4 Crohnových chorob, 3/3 adenokarcinomů žaludku,
2/2 nádorů tenkého střeva (včetně 1/1 adenomu a 1/1 adenokarcinomu), 2/2 karcinomů skvamózních buněk děložního hrdla, 1/3
karcinomů skvamózních buněk jícnu, 1/2 endometriálních adenokarcinomů, 1/1 karcinomu skvamózních buněk kůže, 1/1 nádoru slinivky
a 1/1 karcinomu skvamózních buněk jazyka. Barvení nebylo pozorováno u vzorků nádoru prsu (0/5), nádoru štítné žlázy (0/5), nádorů
mozku (0/4), hepatocelulárního karcinomu (0/4), lymfomu (0/3), nádorů prostaty (0/2), nádorů hlavy a krku (0/2), nádoru nadledvin (0/2),
nádoru močového měchýře (0/2), nádoru kosti (0/2), nádoru slinné žlázy (0/2), seminomu (0/2), nádoru ledvin (0/2), tumoru pankreatu
(0/1), hyperplazie prostaty (0/1), melanomu (0/1), případu tuberkulózy tlustého střeva (0/1) a feochromocytomu (0/1). (Celkový počet
abnormálních nádorů = 267).
NCL-L-CEA-609 se doporučuje k detekci karcinoembryového antigenu v normálních a neoplastických tkáních, jako doplněk ke
konvenční histopatologii s použitím neimunologických histochemických nátěrů.
Obecná omezení
Imunohistochemické vyšetření je vícekrokový diagnostický proces, který spočívá ve specializovaném školení ve výběru vhodných
reagencií; výběru, fixaci a zpracování tkání; přípravě imunohistochemickího sklíčka; a v interpretaci výsledků barvení.
Barvení tkáně závisí na manipulaci s tkání a jejím zpracování před barvením. Nesprávným postupem při fixaci, zmrazení, rozmrazení,
omývání, sušení, zahřívání, krájení řezů nebo kontaminací jinými tkáněmi či tekutinami mohou vzniknout artefakty, může dojít k
vychytávání protilátek nebo k falešně negativním výsledkům. Nekonzistentní výsledky mohou být důsledkem odchylek ve fixačních
metodách a metodách zalití, nebo přirozených odchylek ve tkáni. Nadměrné nebo nedostatečné kontrastní barvení může narušit
4
správnou interpretaci výsledků.
CEA-609-L-CE
Page 57