Leica Novocastra Liquid Mode D'emploi page 55

Kontrola kakovosti
Razlike pri obdelavi tkiva in tehničnih postopkih v laboratoriju uporabnika lahko vodijo do precejšnje variabilnosti rezultatov, kar zahteva
redne interne kontrole učinkovitosti poleg spodaj navedenih postopkov.
Kontrolni vzorci morajo biti sveži vzorci, pridobljeni z obdukcijo/biopsijo/kirurškim posegom, fiksirani s formalinom, obdelani in shranjeni v
parafinskem vosku kakor hitro je mogoče ter na isti način, kot vzorci bolnikov.
Pozitivni kontrolni vzorci tkiva
Uporabite jih za opredelitev pravilno pripravljenih tkiv in ustreznih tehnik barvanja.
Pri vsakem postopku barvanja morate vsakemu sklopu preizkusnih pogojev dodati en pozitiven kontrolni vzorec tkiva.
Za kar najboljšo kontrolo kakovosti in boljše zaznavanje manjših stopenj razkroja reagenta je bolj primerno uporabiti tkivo s šibkim
pozitivnim obarvanjem kot tkivo z močnim pozitivnim obarvanjem.
2
Za pozitivni kontrolni vzorec tkiva priporočamo tkivo kolona.
Če pozitivni kontrolni vzorci tkiva ne pokažejo pozitivnega obarvanja, morate rezultate preizkusnih vzorcev zavreči kot neveljavne.
Negativni kontrolni vzorci tkiva
Pregledati jih morate po pregledu pozitivnih kontrolnih vzorcev tkiva, da preverite specifičnost oznake ciljnega antigena glede na
primarno protitelo.
Za negativni kontrolni vzorec tkiva priporočamo tkivo malih možganov.
Drugače pa se kot negativni kontrolni vzorci pogosto uporablja vrsta različnih celic, ki so prisotne v večini rezin tkiv, vendar pa mora tako
uporabo preveriti uporabnik.
Nespecifično barvanje, če je prisotno, je običajno razpršeno. Opazite lahko tudi posamično obarvanje vezivnega tkiva v rezinah tkiv, kot
posledica premočnega fiksiranja s formalinom. Za razlago rezultatov obarvanja uporabite nespremenjene celice. Obarvanje nekrotičnih
ali degeneriranih celic je pogosto nespecifično. Lažno pozitivni rezultati se lahko pojavijo zaradi ne-imunološke vezave proteinov ali
3
produktov reakcije substrata. Povzročijo jih lahko tudi endogeni encimi, kot so psevdoperoksidaza (eritrociti), endogena peroksidaza
(citokromni C) ali endogeni biotin (npr. jetra, dojke, možgani, ledvice), odvisno od vrste uporabljenega imunskega barvila. Za razlikovanje
med endogensko aktivnostjo encimov ali nespecifično vezavo encimov zaradi specifične imunske reaktivnosti, lahko barvate dodatna
tkiva bolnika izključno ali s kromogenskim substratom ali encimskimi kompleksi (avidin-biotin, streptavidin, označeni polimer) in
kromogenskim substratom. Če pride do specifičnega obarvanja negativnih kontrolnih vzorcev tkiva, morate rezultate vzorcev bolnika
zavreči kot neveljavne.
Negativni kontrolni reagent
Za oceno nespecifičnega barvanja in boljšo razlago specifičnega obarvanja na antigenskem mestu uporabite nespecifični negativni
kontrolni reagent namesto primarnega protitelesa z eno rezino vsakega vzorca bolnika.
Bolnikovo tkivo
Nazadnje preglejte bolnikove vzorce, obarvane z izdelkom NCL-L-CEA-609. Intenzivnost pozitivnega obarvanja ocenite v okviru
morebitnega nespecifičnega obarvanja ozadja z negativnim kontrolnim reagentom. Tako kot pri vseh imunohistokemijskih preizkusih
negativen rezultat pomeni, da antigen ni bil zaznan, ne pa odsotnosti antigena v testiranih celicah/tkivih. Po potrebi uporabite nabor
protiteles za opredelitev napačnih negativnih reakcij.
Pričakovani rezultati
Normalna tkiva
Klon COL-1 je zaznal karcinoembrionalni antigen v epitelijskih celicah kolona, rektuma, požiralnika in grla ter v ploščatih celicah sluznice
materničnega vratu. (Skupno število normalnih primerov = 150).
Nenormalna tkiva
Klon COL-1 je obarval 58/65 tumorjev kolona (vključno z 20/23 metastatskih adenokarcinomov, 18/22 adenokarcinomov, 6/6 adenomov,
5/5 polipov, 4/4 mucinoznih adenokarcinomov, 3/3 metastatskih mucinoznih adenokarcinomov in 2/2 metastatskih karcinomov
celic pečatnega prstana), 33/77 pljučnih tumorjev (vključno s 14/28 adenokarcinomov, 12/28 ploščatoceličnih karcinomov, 3/8
drobnoceličnih karcinomov, 1/6 atipičnih karcinoidov, 1/3 velikoceličnih karcinomov, 1/2 metastatskih ploščatoceličnih karcinomov
in 1/2 metastatskih adenokarcinomov), 10/49 tumorjev jajčnikov (vključno s 3/12 endometrioidnih karcinomov, 3/3 mucinoznih
adenokarcinomov, 2/6 seroznih papilarnih adenokarcinomov, 1/3 mucinoznih cistadenokarcinomov, 1/3 mucinoznih cistadenomov, 0/5
seroznih adenokarcinomov, 0/4 tumorjev celic teka, 0/3 tumorjev granuloznih celic, 0/3 nediferenciranih karcinomov, 0/2 endodermalnih
sinusnih karcinomov, 0/1 disgerminoma, 0/1 nezrelega teratoma, 0/1 leiomiosarkoma, 0/1 mucinoznega mejnega cistadenoma in 0/1
adenokarcinoma), 5/11 metastatskih tumorjev (vključno s 3/4 metastatskih karcinomov želodca, 2/4 metastatskih karcinomov dojk,
0/1 metastatskega nazofaringalnega karcinoma, 0/1 metastatskega adenokarcinoma ščitnice in 0/1 metastatskega ploščatoceličnega
karcinoma požiralnika), 5/5 kroničnih kolitisov, 4/4 Crohnovih bolezni, 3/3 adenocarkinomov želodca, 2/2 tumorjev tankega črevesa
(vključno z 1/1 adenoma in 1/1 adenokarcinoma), 2/2 ploščatoceličnih karcinomov materničnega vratu, 1/3 ploščatoceličnih karcinomov
požiralnika, 1/2 adenokarcinomov endometrija, 1/1 ploščatoceličnega kožnega karcinoma in 1/1 ploščatoceličnega karcinoma jezika.
Obarvanja niso opazili pri tumorjih dojke (0/5), tumorjih ščitnice (0/5), možganskih tumorjih (0/4), hepatocelularnih karcinomih (0/4),
limfomih (0/3), tumorjih prostate (0/2), tumorjih glave in vratu (0/2), tumorjih nadledvične žleze (0/2), tumorjih sečnega mehurja (0/2),
kostnih tumorjih (0/2), tumorjih žlez slinavk (0/2), seminomih (0/2), tumorjih ledvic (0/2), tumorju trebušne slinavke (0/1), hiperplaziji
prostate (0/1), melanomu (0/1), primeru tuberkuloze kolona (0/1) in feokromocitomu (0/1). (Skupno število ocenjenih primerov z
nepravilnostmi = 267).
Izdelek NCL-L-CEA-609 se priporoča za zaznavanje karcinomebrionalnega antigena v normalnih in neoplastičnih tkivih kot
dodatna analiza ob konvencionalni histopatologiji z uporabo neimunskih histokemičnih barvil.
CEA-609-L-CE
Page 54