Leica Novocastra Liquid Mode D'emploi page 19

Minimizar a contaminação microbiana dos reagentes para evitar a possibilidade do aumento da coloração não específica.
Os períodos de incubação ou temperaturas diferentes dos que foram especificados poderão dar azo a resultados errados.
Todas as alterações desse tipo devem ser validadas pelo utilizador.
Controlo Da Qualidade
As diferenças entre os diferentes métodos e técnicas de processamento de tecidos no laboratório do utilizador podem causar uma
grande variabilidade de resultados, requerendo a realização frequente de controlos internos suplementares aos procedimentos que se
seguem.
Os controlos devem ser amostras de autópsia/biopsia/cirurgia frescas, fixadas em formol, processadas e envolvidas em cera parafínica
logo que possível, da mesma maneira que a(s) amostra(s) do(s) doente(s).
Controlo De Tecido Positivo
Usado para assinalar os tecidos correctamente preparados e as técnicas de coloração indicadas.
Cada conjunto de condições de testes, em cada processo de coloração, deve incluir um controlo de tecido positivo.
Os tecidos com uma coloração positiva fraca são mais indicados do que os têm uma coloração positiva forte para proporcionarem um
controlo de qualidade óptimo, bem como para detectar níveis reduzidos de degradação dos reagentes.
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O tecido de controlo positivo recomendado é o cólon.
Se o controlo de tecido positivo não demonstrar uma coloração positiva, os resultados obtidos com as amostras de testes devem ser
considerados inválidos.
Controlo De Tecido Negativo
Este deve ser examinado depois do controlo de tecido positivo para verificar a especificidade da marcação do antígeno objectivado pelo
anticorpo primário.
O tecido de controlo negativo recomendado é o cerebelo.
Alternativamente, a variedade de diferentes tipos de células presentes na maioria das secções de tecidos oferece muitas vezes locais
de controlo negativo, mas isto deve ser verificado pelo utilizador.
A coloração não específica, caso ocorra, tem geralmente um aspecto difuso. A coloração esporádica do tecido conjuntivo pode também
ter lugar em secções de tecido excessivamente fixado em formol. Devem utilizar-se células intactas para a interpretação dos resultados
da coloração. As células necróticas ou degeneradas causam muitas vezes uma coloração não específica. Podem
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verificar-se resultados positivos falsos devido à ligação não imunológica de proteínas ou de produtos da reacção do substrato. Esses
resultados podem também ser causados por enzimas endógenas tais como a pseudoperoxidase (eritrócitos), a peroxidase endógena
(citocromo C), ou a biotina endógena (ex. no fígado, mama, cérebro ou rim) dependendo do tipo de imunocoloração utilizado. Para
diferenciar entre a actividade das enzimas endógenas e as ligações não específicas de enzimas de imunoreactividade específica,
podem colorir-se tecidos adicionais dos doentes exclusivamente com substrato cromogénio ou com complexos de enzimas
(avidina-biotina, estreptavidina, polímero marcado) e substrato-cromogénio, respectivamente. Se ocorrer a coloração específica no
controlo de tecido negativo, os resultados dos testes feitos com as amostras do doente devem ser considerados inválidos.
Controlo De Reagente Negativo
Utilizar um controlo de reagente negativo não específico em vez do anticorpo primário com uma secção de cada amostra de doente
para avaliar a coloração não específica e permitir uma melhor interpretação da coloração específica no local do antígeno.
Tecido Do Doente
Examinar as amostras de pacientes coradas com NCL-L-CEA-609 em último lugar. A intensidade da coloração positiva deve ser
avaliada dentro do contexto de qualquer coloração não específica de fundo do controlo de reagente negativo. Tal como com qualquer
teste imunohistoquímico, um resultado negativo significa que o antígeno não foi detectado, e não que o antígeno se encontrava ausente
das células ou tecido analisados. Se necessário, deve utilizar-se um painel de anticorpos para identificar reacções falso-negativas.
Resultados Previstos
Tecidos normais
O Clone COL-1 detectou antigénio carcinoembriónico em células epiteliais do(a) cólon, recto, esófago e laringe, bem como na mucosa
escamosa do colo do útero. (Número total de casos normais = 150).
Tecidos anormal
O Clone COL-1 corou 58/65 tumores do cólon (incluindo 20/23 adenocarcinomas metastáticos, 18/22 adenocarcinomas, 6/6 adenomas,
5/5 pólipos, 4/4 adenocarcinomas mucinosos, 3/3 adenocarcinomas mucinosos metastáticos e 2/2 carcinomas de células em anel
de sinete metastáticos), 33/77 tumores pulmonares (incluindo 14/28 adenocarcinomas, 12/28 carcinomas de células escamosas,
3/8 carcinomas de células pequenas, 1/6 carcinóides atípicos, 1/3 carcinomas de células grandes, 1/2 carcinomas de células escamosas
metastáticos e 1/2 adenocarcinomas metastáticos), 10/49 tumores ováricos (incluindo 3/12 adenocarcinomas endometrióides,
3/3 adenocarcinomas mucinosos, 2/6 adenocarcinomas papilares serosos, 1/3 cistadenocarcinomas mucinosos, 1/3 cistadenomas
mucinosos, 0/5 adenocarcinomas serosos, 0/4 tumores de células da teca, 0/3 tumores de células da granulosa, 0/3 carcinomas
indiferenciados, 0/2 carcinomas do seio endodérmico, 0/1 disgerminoma, 0/1 teratoma imaturo, 0/1 leiomiossarcoma, 0/1 cistadenoma
mucinoso borderline e 0/1 adenocarcinoma), 5/11 tumores metastáticos (incluindo 3/4 carcinomas gástricos metastáticos, 2/4 carcinomas
mamários metastáticos, 0/1 carcinoma nasofaríngeo metastático, 0/1 adenocarcinoma da tiróide metastático e 0/1 carcinoma de células
escamosas do esófago metastático), 5/5 colite crónica, 4/4 doença de Crohn, 3/3 adenocarcinomas do estômago, 2/2 tumores do
intestino delgado (incluindo 1/1 adenoma e 1/1 adenocarcinoma), 2/2 carcinomas de células escamosas do colo do útero, 1/3 carcinomas
de células escamosas do esófago, 1/2 adenocarcinomas do endométrio, 1/1 carcinoma de células escamosas da pele e 1/1 carcinoma
de células escamosas da língua. Não foi observada coloração em tumores mamários (0/5), tumores da tiróide (0/5), tumores cerebrais
(0/4), carcinomas hepatocelulares (0/4), linfomas (0/3), tumores da próstata (0/2), tumores da cabeça e do pescoço (0/2), tumores da
glândula supra-renal (0/2), tumores da bexiga (0/2), tumores ósseos (0/2), tumores da glândula salivar (0/2), seminomas (0/2), tumores
renais (0/2), um tumor pancreático (0/1), uma hiperplasia da próstata (0/1), um melanoma (0/1), um caso de tuberculose do cólon (0/1)
e um feocromocitoma (0/1). (Número total de casos anormais = 267).
O NCL-L-CEA-609 é recomendado para a detecção de antigénio carcinoembriónico em tecidos normais e neoplásicos, como
auxiliar à histopatologia tradicional, através da utilização de corantes histoquímicos não imunológicos.
CEA-609-L-CE
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