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Minimiser la contamination microbienne des réactifs sinon un accroissement du marquage non spécifique est susceptible de se produire.
Des durées et des températures d'incubation différentes de celles qui ont été spécifiées sont susceptibles de conduire à des résultats
erronés. Toutes les modifications doivent être validées par l'utilisateur.
Contrôle de Qualité
Des différences de traitement des tissus et de procédures techniques du laboratoire de l'utilisateur sont susceptibles de conduire à une
variabilité significative des résultats, ce qui rend nécessaire la mise en œuvre de contrôles en interne en plus des procédures suivantes.
Les contrôles doivent être des spécimens frais provenant d'autopsies, de biopsies ou d'interventions chirurgicales, fixés au formol,
traités et inclus en cire de paraffine dès que possible, de la même façon que le(s) échantillon(s) de patient.
Tissu de Contrôle Positif
Il est utilisé pour indiquer que les tissus ont été préparés correctement et que les techniques de marquage étaient appropriées.
Un contrôle tissulaire positif doit être inclus dans toute opération de marquage pour chaque ensemble de conditions d'analyse.
Un tissu présentant un marquage faiblement positif est plus adapté à un contrôle de qualité optimal qu'un tissu présentant un marquage
fortement positif et il permet de détecter de moindres niveaux de dégradation du réactif.
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Le côlon constitue le tissu de contrôle positif recommandé.
Si le tissu de contrôle positif ne présente pas de marquage positif, les résultats des spécimens analysés doivent être considérés comme
invalides.
Tissu de Contrôle Négatif
Il doit être examiné après le tissu de contrôle positif afin de vérifier la spécificité du marquage de l'antigène cible par l'anticorps primaire.
Le cervelet constitue le tissu de contrôle négatif recommandé.
Sinon, la diversité des types cellulaires présents dans la plupart des tissus permet de disposer fréquemment de sites de contrôle négatif,
mais ils doivent être vérifiés par l'utilisateur.
S'il est présent, le marquage non spécifique prend habituellement une apparence diffuse. Un marquage sporadique du tissu conjonctif
peut également être observé sur des coupes de tissus qui ont été fixées par un excès de formol. Utiliser des cellules intactes pour
l'interprétation des résultats du marquage. Les cellules nécrotiques ou dégénérées sont souvent marquées de façon non spécifique.
3
Des résultats faussement positifs peuvent être observés en raison d'une liaison non immunologique à des protéines ou à des produits de
réaction du substrat. Ils peuvent également être provoqués par des enzymes endogènes comme la pseudoperoxydase (érythrocytes), la
peroxydase endogène (cytochrome C), ou la biotine endogène (foie, sein, cerveau, rein, par exemple) selon le type d'immunomarquage
utilisé. Pour différencier l'activité des enzymes endogènes ou la liaison non spécifique d'enzymes de l'immunoréactivité spécifique,
des tissus supplémentaires du patient peuvent être marqués exclusivement avec le substrat chromogène ou par des complexes
enzymatiques (avidine-biotine, streptavidine, polymère marqué) et le substrat chromogène respectivement. Si un marquage spécifique
se produit dans le tissu de contrôle négatif, les résultats des spécimens du patient doivent être considérés comme invalides.
Réactif de Contrôle Négatif
Utiliser un réactif de contrôle négatif non spécifique à la place de l'anticorps primaire avec une coupe de chaque spécimen du patient
afin d'évaluer le marquage non spécifique et de permettre une meilleure interprétation du marquage spécifique au niveau du site
antigénique.
Tissu du Patient
Examinez les échantillons de patient marqués avec le NCL-L-CEA-609 en dernier. L'intensité du marquage positif doit être
évaluée à la lumière du bruit de fond du marquage non spécifique du réactif de contrôle négatif. Comme pour toutes les analyses
immunohistochimiques, un résultat négatif signifie que l'antigène n'a pas été détecté mais ne signifie pas qu'il est absent des cellules/
tissus testés. Si nécessaire, employer un panel d'anticorps pour identifier les réactions faussement négatives.
Résultats Attendus
Tissus normaux
Le clone COL-1 a détecté l'antigène carcino-embryonnaire dans les cellules épithéliales du côlon, du rectum, de l'œsophage et du larynx
et dans la muqueuse squameuse du col de l'utérus. (Nombre total de cas normaux = 150).
Tissus anormaux
Le clone COL-1 a marqué 58/65 tumeurs du côlon (notamment 20/23 adénocarcinomes métastatiques, 18/22 adénocarcinomes,
6/6 adénomes, 5/5 polypes, 4/4 adénocarcinomes mucineux, 3/3 adénocarcinomes mucineux métastatiques et 2/2 carcinomes à cellules
en bague à chaton métastatiques), 33/77 tumeurs du poumon (notamment 14/28 adénocarcinomes, 12/28 carcinomes cellulaires
squameux, 3/8 carcinomes à petites cellules, 1/6 carcinoïdes atypiques, 1/3 carcinomes à grandes cellules, 1/2 carcinomes cellulaires
squameux métastatiques et 1/2 adénocarcinomes métastatiques), 10/49 tumeurs ovariennes (notamment 3/12 adénocarcinomes
endométroïdes, 3/3 adénocarcinomes mucineux, 2/6 adénocarcinomes séreux papillaires, 1/3 cystadénocarcinomes mucineux,
1/3 cystadénomes mucineux, 0/5 adénocarcinomes séreux, 0/4 tumeurs à cellules thécales, 0/3 tumeurs de la granulosa, 0/3 carcinomes
indifférenciés, 0/2 carcinomes du sinus endodermique, 0/1 dysgerminome, 0/1 tératome malin, 0/1 léiomyosarcome, 0/1 cas limite de
cystadénome mucineux et 0/1 adénocarcinome), 5/11 tumeurs métastatiques (notamment 3/4 carcinomes gastriques métastatiques,
2/4 carcinomes du sein métastatiques, 0/1 carcinome du nasopharynx métastatique, 0/1 adénocarcinome de la thyroïde métastatique
et 0/1 carcinome squameux de l'œsophage métastatique), 5/5 colites chroniques, 4/4 maladies de Crohn, 3/3 adénocarcinomes de
l'estomac, 2/2 tumeurs de l'intestin grêle (notamment 1/1 adénome et 1/1 adénocarcinome), 2/2 carcinomes squameux du col de l'utérus,
1/3 carcinomes squameux de l'œsophage, 1/2 adénocarcinomes de l'endomètre, 1/1 carcinome squameux cutané et 1/1 carcinome
squameux de la langue. Aucune coloration n'a été détectée dans les tumeurs du sein (0/5), les tumeurs de la thyroïde (0/5), les tumeurs
du cerveau (0/4), les carcinomes hépatocellulaires (0/4), les lymphomes (0/3), les tumeurs de la prostate (0/2), les tumeurs de la tête
et du cou (0/2), les tumeurs de la glande surrénale (0/2), les tumeurs de la vessie (0/2), les tumeurs osseuses (0/2), les tumeurs de la
glande salivaire (0/2), les séminomes (0/2), les tumeurs du rein (0/2), une tumeur du pancréas (0/1), une hyperplasie prostatique (0/1),
un mélanome (0/1), un cas de tuberculose du côlon (0/1) et un phéochromocytome (0/1). (Nombre total de cas anormaux = 267).
Le NCL-L-CEA-609 est recommandé pour la détection de l'antigène carcino-embryonnaire dans les tissus normaux et
néoplasiques, en complément à l'histopathologie traditionnelle utilisant des marqueurs histochimiques non immunologiques.
CEA-609-L-CE
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