Leica Novocastra Liquid Mode D'emploi page 10

Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti, allo scopo di evitare un aumento di colorazione aspecifica.
Tempi o temperature d'incubazione diversi da quelli specificati possono condurre a risultati non veritieri. Tali variazioni devono
essere convalidate dall'utente.
Controllo Qualità
Differenze nella processazione del tessuto e nelle tecniche in uso presso il laboratorio dell'utente possono produrre una discrepanza
significativa nei risultati, rendendo necessaria la regolare esecuzione di controlli interni, in aggiunta alle procedure descritte di seguito.
I controlli devono essere costituiti da campioni biologici freschi autoptici/bioptici/chirurgici e devono essere il più rapidamente possibile
fissati in formalina, processati ed inclusi in paraffina, allo stesso modo dei campioni biologici ottenuti dal paziente.
Controllo Positivo Del Tessuto
È usato per indicare tessuti correttamente preparati e tecniche di colorazione appropriate.
Per ogni gruppo di condizioni del test e ogni volta che viene eseguita la colorazione, deve essere incluso un controllo positivo del tessuto.
Un tessuto a debole colorazione positiva è più adatto di uno a colorazione positiva intensa per un ottimale controllo qualità e per mettere
in evidenza anche minimi livelli di degradazione del reagente.
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Il tessuto raccomandato per il controllo positivo è il colon.
Se il controllo positivo del tessuto non dimostra colorazione positiva, i risultati con i campioni biologici del test vanno considerati non validi.
Controllo Negativo Del Tessuto
Va esaminato dopo il controllo positivo, per verificare la specificità nei confronti dell'antigene bersaglio da parte dell'anticorpo primario.
Il tessuto raccomandato per il controllo negativo è il cervelletto.
In alternativa, la varietà dei tipi cellulari presenti nella maggior parte delle sezioni tissutali offre spesso siti di controllo negativo, ma
questo va verificato dall'utente.
La colorazione aspecifica, se presente, assume di solito aspetto diffuso. La colorazione sporadica del tessuto connettivo può anche
manifestarsi in seguito ad iperfissazione di sezioni di tessuto in formalina. Per l'interpretazione dei risultati della colorazione, usare
cellule intatte. Le cellule necrotiche o degenerate si colorano spesso in maniera aspecifica . Si possono osservare risultati falsamente
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positivi, dovuti a legame non immunologico delle proteine o a prodotti di reazione del substrato. Tali falsi positivi possono essere anche
causati da enzimi endogeni quali la pseudoperossidasi (eritrociti), la perossidasi endogena (citocromo C) o la biotina endogena
(es. fegato, mammella, cervello, rene), a seconda del tipo di immunocolorazione usato. Per differenziare l'attività enzimatica endogena
o il legame enzimatico aspecifico dall'immunoreattività specifica, possono essere colorati ulteriori tessuti del paziente esclusivamente
con substrato cromogeno o con complessi enzimatici (avidina-biotina, streptavidina, polimero marcato) e substrato cromogeno. Se nel
controllo negativo del tessuto compare una colorazione specifica, i risultati sui campioni biologici ottenuti dal paziente devono essere
considerati non validi.
Controllo Negativo Del Reagente
Usare un controllo negativo aspecifico del reagente in luogo dell'anticorpo primario, con una sezione di ogni campione biologico
del paziente, per valutare la colorazione aspecifica e per consentire una migliore interpretazione della colorazione specifica in
corrispondenza del sito antigenico.
Tessuto Del Paziente
Successivamente, esaminare i campioni dei pazienti colorati con NCL-L-CEA-609. L'intensità della colorazione positiva va analizzata nel
contesto di qualsiasi colorazione aspecifica di fondo del controllo negativo del reagente. Come per tutti gli altri test immunoistochimici,
un risultato negativo significa che l'antigene non è stato determinato, ma non necessariamente che fosse assente dalle cellule o dal
tessuto esaminato. Se necessario, usare un pannello di anticorpi per identificare reazioni falsamente negative.
Risultati Attesi
Tessuti normali
Il clone COL-1 ha rilevato l'antigene carcinoembrionico in cellule epiteliali di colon, retto, esofago e laringe e nella mucosa squamosa
della cervice. (Numero complessivo di casi normali = 150).
Abnorme dei tessuti
Il clone COL-1 ha colorato 58/65 tumori del colon (compresi 20/23 adenocarcinomi metastatici, 18/22 adenocarcinomi, 6/6 adenomi, 5/5 polipi,
4/4 adenocarcinomi mucinosi, 3/3 adenocarcinomi mucinosi metastatici e 2/2 carcinomi metastatici a cellule signet-ring), 33/77 tumori
del polmone (compresi 14/28 adenocarcinomi, 12/28 carcinomi a cellule squamose, 3/8 carcinomi a piccole cellule, 1/6 carcinoidi atipici,
1/3 carcinomi a grandi cellule, 1/2 carcinomi metastatici a cellule squamose e 1/2 adenocarcinomi metastatici), 10/49 tumori ovarici (compresi
3/12 adenocarcinomi endometrioidi, 3/3 adenocarcinomi mucinosi, 2/6 adenocarcinomi sierosi papillari, 1/3 cistoadenocarcinomi mucinosi,
1/3 cistoadenomi mucinosi, 0/5 adenocarcinomi sierosi, 0/4 tumore a cellule tecali, 0/3 tumori a cellule della granulosa, 0/3 carcinomi
indifferenziati, 0/2 tumori del seno endodermale, 0/1 disgerminoma, 0/1 teratoma immaturo, 0/1 leiomiosarcoma, 0/1 cistoadenoma mucinoso
borderline e 0/1 adenocarcinoma), 5/11 tumori metastatici (compresi 3/4 carcinomi gastrici metastatici, 2/4 carcinomi mammari metastatici,
0/1 carcinoma nasofaringeo metastatico, 0/1 adenocarcinoma tiroideo metastatico e 0/1 carcinoma esofageo metastatico a cellule squamose),
5/5 coliti croniche, 4/4 malattie di Crohn, 3/3 adenocarcinomi dello stomaco, 2/2 tumori dell'intestino tenue (compresi 1/1 adenoma e
1/1 adenocarcinoma), 2/2 carcinomi a cellule squamose della cervice, 1/3 carcinomi esofagei a cellule squamose, 1/2 adenocarcinomi
endometriali, 1/1 carcinoma a cellule squamose della pelle e 1/1 carcinoma a cellule squamose della lingua. Non è stata rilevata alcuna
colorazione in tumori mammari (0/5), tumori della tiroide (0/5), tumori cerebrali (0/4), carcinomi epatocellulari (0/4), linfomi (0/3), tumori della
prostata (0/2), tumori della testa e del collo (0/2), tumori della ghiandola surrenale (0/2), tumori della vescica (0/2), tumori ossei (0/2), tumori
della ghiandola salivare (0/2), seminomi (0/2), tumori del rene (0/2), un tumore del pancreas (0/1), un'iperplasia prostatica (0/1), un melanoma
(0/1), un caso di tubercolosi del colon (0/1) e un feocromocitoma (0/1). (Numero complessivo di casi anomali = 267).
L'uso di NCL-L-CEA-609 è consigliato per il rilevamento dell'antigene carcinoembrionico in tessuti normali e neoplastici, in
aggiunta all'istopatologia convenzionale che si avvale delle colorazioni istochimiche non immunologiche.
CEA-609-L-CE
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