Leica BIOSYSTEMS BOND PA0016 Mode D'emploi page 38

• Próbki przed i po utrwaleniu oraz wszelkie materiały narażone na kontakt z nimi należy traktować jak materiały potencjalnie zakaźne i
należy je utylizować z zachowaniem odpowiednich środków ostrożności². Podczas pobierania pipetą nie wolno zasysać odczynników
ustami i należy unikać kontaktu odczynników i preparatów ze skórą oraz błonami śluzowymi. W razie kontaktu odczynników lub
próbek ze szczególnie narażonymi miejscami przemyć miejsce kontaktu dużą ilością wody. Należy zasięgnąć porady lekarza.
• Wszelkie potencjalnie toksyczne składniki należy utylizować zgodnie z krajowymi lub lokalnymi przepisami.
• Chronić odczynniki przed skażeniem drobnoustrojami, ponieważ może ono doprowadzić do zwiększonego barwienia
niespecyficznego.
• Zastosowanie czasów odmaskowywania, inkubacji lub temperatur innych niż podano w instrukcji może spowodować błędne wyniki.
Wszelkie zmiany tego typu muszą zostać zweryfikowane przez użytkownika.
Instrukcja stosowania
Przeciwciało pierwszorzędowe p16 (6H12) zostało opracowane z myślą o zastosowaniu w automatycznym systemie BOND
(obejmującym systemy Leica BOND-MAX i Leica BOND-III) w połączeniu z BOND Polymer Refine Detection. Zalecany protokół
barwienia dla przeciwciała pierwszorzędowego p16 (6H12) to IHC Protocol F. Zaleca się cieplne odmaskowywanie epitopu przy użyciu
roztworu BOND Epitope Retrieval Solution 2 przez 20 minut.
Oczekiwane wyniki
Tkanki prawidłowe
Klon 6H12 wykrywa białko p16, które ulega ekspresji w wysoce ograniczonym wzorze w pewnych komórkach w określonych tkankach.
Wzór barwienia jest jądrowy, ale barwienie cytoplazmatyczne obserwuje się w większości typów komórek, które eksprymują p16.
Immunoreaktywność obserwowano w siatkowym nabłonku krypty i komórkach dendrytycznych pęcherzyków w migdałkach, komórkach
wysp trzustkowych, komórkach Leydiga w jądrach, rozproszonych komórkach nabłonka dróg żółciowych i sporadycznie w gruczołowych
komórkach nabłonka w śluzówce macicy. Sporadycznie słabe barwienie obserwowano w gruczołach wydzielniczych żołądka, komórkach
gruczołowych i mioepitelialnych w sutku i w nadnerczach. Zaobserwowano również barwienie makrofagów i niektórych fibroblastów. Nie
stwierdzono barwienia wielu innych prawidłowych tkanek (całkowita liczba prawidłowych przypadków = 149).
Tkanki nowotworowe
Klon 6H12 wybarwił 30/42 raki szyjki macicy (w tym 25/31 raki płaskonabłonkowe, 2/4 gruczolakoraki szyjki macicy, 2/2
gruczolakoraki endometrioidalne, 1/2 gruczolakoraka endokrynnego, 0/2 gruczolakoraków typu jelitowego i 0/1 surowiczych raków
brodawkowatych), 21/39 raki płaskonabłonkowe jamy ustnej i gardła, 3/6 nowotwory piersi (w tym 2/4 inwazyjne raki przewodowe i
1/2 gruczolakowłókniaka), 2/10 guzy jelit (w tym 2/4 gruczolakoraki okrężnicy, 0/3 gruczolakoraków odbytnicy, 0/2 gruczolaki jelita i
0/1 gruczolakoraków jelita cienkiego), 2/5 komórek wątrobowokomórkowych, 2/5 guzy głowy i szyi (w tym 1/1 gruczolakoraka jamy
ustnej, 1/1 gruczolaka wielopostaciowego gruczołu ślinowego, 0/1 raków torbielowatych, 0/1 raków płaskokomórkowych języka i
0/1 raków jamy nosowo-gardłowej), 2/4 guzy mózgu (w tym 1/3 oponiaka i 1/1 gwiaździaka), 2/4 gruczolakoraki żołądka, 2/4 guzy
płuc (w tym 1/1 gruczolakoraka, 1/1 raka komórek śródmózgowia i 0/2 raków płaskonabłonkowych), 2/3 gruczolakoraki gruczołu
krokowego, 2/2 gruczolakoraki endometrium, 1/5 guza tarczycy (w tym 1/1 raka pęcherzykowego, 0/1 gruczolakoraków brodawkowych
i 0/3 gruczolaków), 1/5 guza przerzutowego, 1/4 raka kolczystokomórkowego przełyku, 1/4 guza jajnika (w tym 1/2 gruczolakoraka
endometrioidalnego, 0/1 guzów z komórek ziarnistych i 0/1 gruczolakoraków), 1/2 nowotwór kości (w tym 1/1 chrzęstniakomięsaka i 0/1
kostniakomięsaków) i 1/1 gruczolakoraka trzustki. Nie wykryto wybarwienia w chłoniakach (0/3), guzach pęcherza moczowego (0/3),
guzach nerek (0/3), guzach skóry (0/3), guzach nadnerczy (0/2), nasieniakach (0/2) i przeroście gruczołu krokowego (0/1). (Łączna
liczba ocenionych nieprawidłowych przypadków = 162).
Zaleca się stosowanie p16 (6H12) do wykrywania białka p16 w tkankach zdrowych i rakowych, jako uzupełnienie
konwencjonalnego badania histopatologicznego opartego na nieimmunologicznym barwieniu histologicznym.
Szczególne ograniczenia dla produktu
Przeciwciało p16 (6H12) zostało zoptymalizowane w Leica Biosystems pod kątem stosowania z BOND Polymer Refine Detection i
pomocniczymi odczynnikami BOND. W tych okolicznościach użytkownicy, którzy postępują niezgodnie z zalecanymi procedurami
testowymi muszą wziąć odpowiedzialność za interpretację wyników chorego. Czasy protokołu mogą być różne w związku ze
zróżnicowaniem w zakresie utrwalenia tkanek i skuteczności wzmocnienia przez przeciwciało i należy je określić doświadczalnie.
Odczynniki kontroli negatywnej należy stosować podczas optymalizacji warunków odmaskowywania i czasów protokołu.
Rozwiązywanie problemów
W celu uzyskania dalszych informacji o działaniu zaradczym zob. odsyłacz 3.
W celu zgłoszenia nietypowego barwienia należy skontaktować się z lokalnym dystrybutorem lub z regionalnym biurem firmy Leica
Biosystems.
Dodatkowe informacje
Dodatkowe informacje dotyczące immunobarwienia przy użyciu odczynników BOND opisanego w działach „Zasady postępowania",
„Wymagane materiały", „Przygotowanie próbek", „Kontrola Jakości", „Weryfikacja testu", „Interpretacja barwienia", „Objaśnienie symboli
na etykietach" i „Ograniczenia ogólne" można znaleźć w punkcie „Stosowanie odczynników BOND" w dokumentacji użytkownika
systemu BOND.
Bibliografia
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.
4. Schache AG, Powell NG, Cuschieri KS et al. HPV-Related Oropharynx cancer in the United Kingdom: An Evolution in the
understanding of disease etiology. Cancer Research. 2016; 76(22): 6598-6606.
5. Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D et al. Overexpression of p16(INK4A) as a specific marker for dysplastic and neoplastic epithelial
cells of the cervix uteri. Int J Cancer. 2001 Apr 15;92(2):276-84.
Data publikacji
02 lipca 2019
PA0016
Page 37