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réactifs avec la bouche et éviter tout contact des réactifs et des spécimens avec la peau et les membranes muqueuses. Rincer avec de
grandes quantités d'eau en cas de contact des réactifs ou des spécimens avec des zones sensibles. Consulter un médecin.
Minimiser la contamination microbienne des réactifs sinon un accroissement du marquage non spécifique est susceptible de se produire.
Des durées et des températures d'incubation différentes de celles qui ont été spécifiées sont susceptibles de conduire à des résultats
erronés. Toutes les modifications doivent être validées par l'utilisateur.
Contrôle de Qualité
Des différences de traitement des tissus et de procédures techniques du laboratoire de l'utilisateur sont susceptibles de conduire à une
variabilité significative des résultats, ce qui rend nécessaire la mise en œuvre de contrôles en interne en plus des procédures suivantes.
Les contrôles doivent être des spécimens frais provenant d'autopsies, de biopsies ou d'interventions chirurgicales, fixés au formol,
traités et inclus en cire de paraffine dès que possible, de la même façon que le(s) échantillon(s) de patient.
Tissu de Contrôle Positif
Il est utilisé pour indiquer que les tissus ont été préparés correctement et que les techniques de marquage étaient appropriées.
Un contrôle tissulaire positif doit être inclus dans toute opération de marquage pour chaque ensemble de conditions d'analyse.
Un tissu présentant un marquage faiblement positif est plus adapté à un contrôle de qualité optimal qu'un tissu présentant un marquage
fortement positif et il permet de détecter de moindres niveaux de dégradation du réactif.
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Le tissu de contrôle positif recommandé est les amygdales.
Si le tissu de contrôle positif ne présente pas de marquage positif, les résultats des spécimens analysés doivent être considérés comme
invalides.
Tissu de Contrôle Négatif
Il doit être examiné après le tissu de contrôle positif afin de vérifier la spécificité du marquage de l'antigène cible par l'anticorps primaire.
Le tissu de contrôle négatif recommandé est le cervelet.
Sinon, la diversité des types cellulaires présents dans la plupart des tissus permet de disposer fréquemment de sites de contrôle négatif,
mais ils doivent être vérifiés par l'utilisateur.
S'il est présent, le marquage non spécifique prend habituellement une apparence diffuse. Un marquage sporadique du tissu conjonctif
peut également être observé sur des coupes de tissus qui ont été fixées par un excès de formol. Utiliser des cellules intactes pour
l'interprétation des résultats du marquage. Les cellules nécrotiques ou dégénérées sont souvent marquées de façon non spécifique.
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Des résultats faussement positifs peuvent être observés en raison d'une liaison non immunologique à des protéines ou à des produits de
réaction du substrat. Ils peuvent également être provoqués par des enzymes endogènes comme la pseudoperoxydase (érythrocytes), la
peroxydase endogène (cytochrome C), ou la biotine endogène (foie, sein, cerveau, rein, par exemple) selon le type d'immunomarquage
utilisé. Pour différencier l'activité des enzymes endogènes ou la liaison non spécifique d'enzymes de l'immunoréactivité spécifique,
des tissus supplémentaires du patient peuvent être marqués exclusivement avec le substrat chromogène ou par des complexes
enzymatiques (avidine-biotine, streptavidine, polymère marqué) et le substrat chromogène respectivement. Si un marquage spécifique
se produit dans le tissu de contrôle négatif, les résultats des spécimens du patient doivent être considérés comme invalides.
Réactif de Contrôle Négatif
Utiliser un réactif de contrôle négatif non spécifique à la place de l'anticorps primaire avec une coupe de chaque spécimen du patient
afin d'évaluer le marquage non spécifique et de permettre une meilleure interprétation du marquage spécifique au niveau du site
antigénique.
Tissu du Patient
Examiner les échantillons du patient marqués au NCL-L-bcl-2 en dernier lieu. L'intensité du marquage positif doit être évaluée
à la lumière du bruit de fond du marquage non spécifique du réactif de contrôle négatif. Comme pour toutes les analyses
immunohistochimiques, un résultat négatif signifie que l'antigène n'a pas été détecté mais ne signifie pas qu'il est absent des cellules/
tissus testés. Si nécessaire, employer un panel d'anticorps pour identifier les réactions faussement négatives.
Résultats Attendus
Tissus normaux
Le clone bcl-2/100/D5 a coloré le cytoplasme et la membrane des lymphocytes dans la zone du manteau et les zones de lymphocytes T
de la rate, des ganglions lymphatiques, des amygdales et du thymus. Une coloration a également été observée dans les tubules rénaux,
les kératinocytes de la membrane basale, les cellules épithéliales de la membrane basale du col utérin et des trompes de Fallope, les
fibroblastes de la matrice des seins et des ovaires, les cellules musculaires lisses du myomètre et les syncytiotrophoblastes du placenta.
(Nombre total de cas normaux évalués = 55).
Tissus anormaux
Le clone bcl-2/100/D5 a marqué 88/123 lymphomes diffus à grandes cellules B, 8/26 maladies de Hodgkin, 13/15 lymphomes
folliculaires, 11/12 lymphomes lymphocytaires chroniques, 7/7 lymphomes du manteau, 3/6 lymphomes anaplasiques à grandes
cellules T, 4/4 lymphomes angioimmunoblastiques à lymphocytes T, 3/3 lymphomes à lymphocytes T, 3/3 lymphomes à cellules T/NK,
1/1 lymphome lymphoblastique aigu à lymphocytes B, 1/1 lymphome lymphoblastique aigu à cellules B/T primitives, 1/1 lymphome à
lymphocytes T périphériques, et 1/1 lymphome de la zone marginale, 2/4 tumeurs du poumon (dont 1/1 carcinome non à petites cellules,
1/1 adénocarcinome, 0/1 carcinome à cellules squameuses et 0/1 carcinome à grandes cellules), 2/4 tumeurs ovariennes (dont 1/1
cystadénocarcinome séreux, 1/1 carcinome à cellules claires, 0/1 tumeur maligne des cellules germinales et 0/1 cystadénocarcinome
mucineux), 1/4 tumeurs du foie (dont 1/1 carcinome métastatique, 0/2 carcinomes hépatocellulaire et 0/1 cholangiocarcinome), 3/3
carcinomes papillaires de la thyroïde, 2/2 carcinomes canalaires infiltrants du sein, 2/2 tumeurs métastatiques d'origine inconnue, 1/2
carcinomes des cellules rénales, 1/2 carcinomes spinocellulaires du col de l'utérus et 1/1 tumeur carcinoïde atypique du thymus. Aucune
coloration n'a été observée dans des tumeurs du cerveau (0/2), des tumeurs de l'œsophage (0/2), des tumeurs de l'estomac (0/2), des
tumeurs de la langue (0/2), des tumeurs testiculaires (0/2), des tumeurs du côlon (0/2), des tumeurs du rectum (0/2), des tumeurs de la
peau (0/2), des tumeurs des tissus mous (0/2) et une tumeur du larynx (0/1). (Nombre total de cas de tumeurs évaluées = 236).
NCL-L-bcl-2 est recommandé pour l'évaluation de l'expression de l'oncoprotéine bcl-2 dans les tissus normaux et
néoplasiques.
BCL-2-L-CE
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