Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 10

Prima e dopo la fissazione, i campioni biologici e tutti i materiali ad essi esposti vanno trattati come potenzialmente infettanti e smaltiti
con le appropriate precauzioni. Non pipettare i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni biologici con la
1
pelle e con le mucose. Se i reagenti o i campioni biologici vengono a contatto con zone sensibili, sciacquare abbondantemente le parti
interessate. Consultare il medico.
Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti, allo scopo di evitare un aumento di colorazione aspecifica.
Tempi o temperature d'incubazione diversi da quelli specificati possono condurre a risultati non veritieri. Tali variazioni devono
essere convalidate dall'utente.
Controllo Qualità
Differenze nella processazione del tessuto e nelle tecniche in uso presso il laboratorio dell'utente possono produrre una discrepanza
significativa nei risultati, rendendo necessaria la regolare esecuzione di controlli interni, in aggiunta alle procedure descritte di seguito.
I controlli devono essere costituiti da campioni biologici freschi autoptici/bioptici/chirurgici e devono essere il più rapidamente possibile
fissati in formalina, processati ed inclusi in paraffina, allo stesso modo dei campioni biologici ottenuti dal paziente.
Controllo Positivo Del Tessuto
È usato per indicare tessuti correttamente preparati e tecniche di colorazione appropriate.
Per ogni gruppo di condizioni del test e ogni volta che viene eseguita la colorazione, deve essere incluso un controllo positivo del
tessuto.
Un tessuto a debole colorazione positiva è più adatto di uno a colorazione positiva intensa per un ottimale controllo qualità e per mettere
in evidenza anche minimi livelli di degradazione del reagente.
2
Il tessuto di controllo positivo raccomandato è la tonsilla.
Se il controllo positivo del tessuto non dimostra colorazione positiva, i risultati con i campioni biologici del test vanno considerati non
validi.
Controllo Negativo Del Tessuto
Va esaminato dopo il controllo positivo, per verificare la specificità nei confronti dell'antigene bersaglio da parte dell'anticorpo primario.
Il tessuto di controllo negativo raccomandato è il cervelletto.
In alternativa, la varietà dei tipi cellulari presenti nella maggior parte delle sezioni tissutali offre spesso siti di controllo negativo, ma
questo va verificato dall'utente.
La colorazione aspecifica, se presente, assume di solito aspetto diffuso. La colorazione sporadica del tessuto connettivo può anche
manifestarsi in seguito ad iperfissazione di sezioni di tessuto in formalina. Per l'interpretazione dei risultati della colorazione, usare
cellule intatte. Le cellule necrotiche o degenerate si colorano spesso in maniera aspecifica . Si possono osservare risultati falsamente
3
positivi, dovuti a legame non immunologico delle proteine o a prodotti di reazione del substrato. Tali falsi positivi possono essere anche
causati da enzimi endogeni quali la pseudoperossidasi (eritrociti), la perossidasi endogena (citocromo C) o la biotina endogena
(es. fegato, mammella, cervello, rene), a seconda del tipo di immunocolorazione usato. Per differenziare l'attività enzimatica endogena
o il legame enzimatico aspecifico dall'immunoreattività specifica, possono essere colorati ulteriori tessuti del paziente esclusivamente
con substrato cromogeno o con complessi enzimatici (avidina-biotina, streptavidina, polimero marcato) e substrato cromogeno. Se nel
controllo negativo del tessuto compare una colorazione specifica, i risultati sui campioni biologici ottenuti dal paziente devono essere
considerati non validi.
Controllo Negativo Del Reagente
Usare un controllo negativo aspecifico del reagente in luogo dell'anticorpo primario, con una sezione di ogni campione biologico
del paziente, per valutare la colorazione aspecifica e per consentire una migliore interpretazione della colorazione specifica in
corrispondenza del sito antigenico.
Tessuto Del Paziente
Successivamente, esaminare i campioni biologici del paziente colorati con NCL-L-bcl-2. L'intensità della colorazione positiva va
analizzata nel contesto di qualsiasi colorazione aspecifica di fondo del controllo negativo del reagente. Come per tutti gli altri test
immunoistochimici, un risultato negativo significa che l'antigene non è stato determinato, ma non necessariamente che fosse assente
dalle cellule o dal tessuto esaminato. Se necessario, usare un pannello di anticorpi per identificare reazioni falsamente negative.
Risultati Attesi
Tessuti normali
Il clone bcl-2/100/D5 ha colorato il citoplasma e la membrana dei linfociti nelle zone marginali e nelle zone delle cellule T di milza,
linfonodo, tonsille e timo. È stata osservata anche colorazione nei tubuli renali, nei cheratinociti basali, nelle cellule epiteliali basali
di cervice e tuba di Faloppio, nei fibroblasti stromatici della mammella e delle ovaie, nelle cellule muscolari lice di miometrio e
sincitiotrofoblasti della placenta. (Numero totale di casi normali esaminati = 55).
Abnorme dei tessuti
Il clone bcl-2/100/D5 ha colorato 88/113 linfomi diffusi a grandi cellule B, 8/26 linfomi di Hodgkin, 13/15 linfomi mantellari, 11/12 linfomi
linfocitici cronici, 7/7 linfomi mantellari, 3/6 linfomi anaplastici a grandi cellule T, 4/4 linfomi angioimmunoblastici a cellule T, 3/3 linfomi
a cellule T, 3/3 linfomi T/NK, 1/1 linfomi linfoblastici acuti a cellule B, 1/1 linfoblastici acuti a cellule B primitivi, 1/1 linfomi a cellule T
periferiche e 1/1 linfomi della zona marginale, 2/4 tumori ai polmoni (inclusi 1/1 carcinoma non a piccole cellule, 1/1 adenocarcinoma,
0/1 carcinoma a cellule squamose e 0/1 carcinoma a grandi cellule), 2/4 tumori ovarici (inclusi 1/1 cistoadenocarcinoma sieroso, 1/1
carcinoma a cellule chiare, 0/1 tumore a cellule germinali maligne e 0/1 cistoadenocarcinoma mucinoso), 1/4 tumori epatici (inclusi 1/1
carcinoma metastatico, 0/2 carcinoma epatocellulari e 0/1 colangiocarcinoma), 3/3 carcinomi papillari tiroidei 2/2 carcinomi mammari
duttali (infiltranti), 2/2 tumori metastatici di origine sconosciuta, 1/2 carcinomi delle cellule renali del rene, 1/2 carcinomi a cellule
squamose cervicali e 1/2 carcinoidi atipici del timo. Non è stata osservata alcuna colorazione nei tumori del cervello (0/2), tumori
esofagei (0/2), tumori allo stomaco (0/2), tumori della lingua (0/2), tumori testicolari (0/2), tumori del colon (0/2), tumori rettali (0/2),
tumori della pelle (0/2), tumori dei tessuti molli (0/2) e un tumore della laringe (0/1). (Numero totale di casi tumorali esaminati = 236).
NCL-L-bcl-2 è raccomandato per la valutazione dell'espressione dell'oncoproteina bcl-2 nei tessuti normali e neoplastici.
BCL-2-L-CE
Page 9