Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 37

Kalite Kontrol
Kullanıcının laboratuvarındaki doku işleme ve teknik prosedürlerdeki değişiklikler, sonuçlarda önemli farklılıklara neden olabilir ve
aşağıdaki prosedürlere ek olarak dahili kontrollerin düzenli şekilde yapılmasını gerektirir.
Kontroller, mümkün olan en kısa sürede ve hasta örneği (örnekleri) ile aynı şekilde formalinle fikse edilmiş, işlenmiş ve parafin mumuna
gömülmüş taze otopsi/biyopsi/cerrahi numune olmalıdır.
Pozitif Doku Kontrolü
Doğru hazırlanmış dokuları ve düzgün boyama tekniklerini belirtmek için kullanılır.
Bir pozitif doku kontrolü, her boyama çalıştırmasında test koşullarının her seti için dahil edilmelidir.
Optimal kalite kontrol için ve reagent degradasyonunun minör düzeylerini tespit etmek için zayıf pozitif boyamaya sahip bir doku, güçlü
pozitif boyamaya sahip bir dokudan daha uygundur.
2
Önerilen pozitif kontrol dokusu bademciktir.
Pozitif doku kontrolü, pozitif boyamayı göstermezse test numuneleri ile elde edilen sonuçlar geçersiz olarak ele alınmalıdır.
Negatif Doku Kontrolü
Pozitif doku kontrolünden sonra hedef antijenin etiketleme spesifitesini primer antikorla kontrol etmek için gerçekleştirilmelidir.
Önerilen negatif kontrol dokusu beyinciktir.
Pek çok doku seksiyonunda bulunan farklı hücre tiplerinin çeşitliliği, genelde negatif kontrol bölgeleri sağlar ancak bu, kullanıcı
tarafından kontrol edilmelidir. Nonspesifik boyama, mevcutsa genelde difüz bir görünüme sahiptir.
Bağ dokusu sporadik boyama, aşırı formalinle fikse edilmiş dokulardan seksiyonlarda da gözlemlenebilir. Boyama sonuçlarının
yorumlanması için intakt hücreler kullanın. Nekrotik veya dejenere hücreler, genelde belirsiz şekilde boyanabilir.
3
Yanlış pozitif sonuçlar, substrat reaksiyon ürünleri veya proteinlerin immünolojik olmayan protein bağlanması nedeniyle görülebilir.
Bunlar, kullanılan immüno boyamanın tipine bağlı olarak psödoperoksidaz (eritrositler), endojen peroksidaz (sitokrom C) veya endojen
biotin (örn. karaciğer, meme, beyin, böbrek) gibi endojen enzimler nedeniyle de ortaya çıkabilir.
Endojen enzim aktivitesini veya enzimlerin nonspesifik bağlanmasını, spesifik immünreaktiviteden ayırt etmek için ilave hasta dokuları,
sadece sırasıyla substrat kromojen veya enzim kompleksleriyle (avidin biotin, streptavidin, etiketli polimer) ve substrat kromojen ile
boyanabilir. Spesifik boyamanın, negatif doku kontrolünde ortaya çıkması durumunda hasta numuneleri ile elde edilen sonuçlar geçersiz
olarak ele alınmalıdır.
Negatif Reagent Kontrolü
Antijen bölgede nonspesifik boyamanın değerlendirilmesi ve spesifik boyamanın daha iyi yorumlanmasını sağlamak amacıyla her hasta
numunesinin bir seksiyonu ile primer antikorun yerine bir nonspesifik negatif reagent kontrolü kullanın.
Hasta Dokusu
NCL-L-bcl-2 ile boyanan son hasta numunelerini inceleyin. Pozitif boyama intensitesi, negatif reagent kontrolünün herhangi bir
nonspesifik arka plan boyamasının kapsamında değerlendirilmelidir. Herhangi bir immünohistokimyasal test ile negatif bir sonuç,
antijenin tespit edilmediği anlamına gelir; antijenin test edilen hücrelerde/dokuda mevcut olmadığı anlamına gelmez. Gerekiyorsa yanlış
negatif reaksiyonları belirlemek için bir antikor paneli kullanın.
Öngörülen Sonuçlar
Normal Dokular
Klon bcl-2/100/D5 dalak, lenf düğümü, bademcik ve timusun T hücresi alanları ve mantle bölgelerinde lenfositlerin sitoplazma ve
membranını boyamıştır. Boyama ayrıca renal tübüller, bazal keratinositler, serviks ve fallop tüpünün bazal epitelyal hücreleri, meme ve
overin stromal fibroblastları ve plasentanın sinsityotrofoblastlarında görülmüştür. (Değerlendirilen toplam normal vaka sayısı = 55).
Abnormal Dokular
Klon bcl-2/100/D5 88/113 difüz büyük B hücreli lenfomayı, 8/26 Hodgkin hastalığını, 13/15 foliküler lenfomayı, 11/12 kronik lenfositik
lenfomayı, 7/7 mantle hücreli lenfomayı, 3/6 T hücreli anaplastik büyük hücreli lenfomayı, 4/4 anjiyoimmunoblastik T hücreli lenfomayı,
3/3 T hücreli lenfomayı, 3/3 T/NK lenfomayı, 1/1 B hücreli akut lenfoblastik lenfomayı, 1/1 primitiv B/T hücreli akut lenfoblastik
lenfomayı, 1/1 periferal T hücreli lenfomayı, ve 1/1 marjinal zon lenfomayı, 2/4 akciğer tümörünü (1/1 küçük hücreli dışı karsinom, 1/1
adenokarsinom, 0/1 skuamöz hücreli karsinom ve 0/1 büyük hücreli karsinom dahil), 2/4 over tümörünü (1/1 seröz kistadenokarsinom,
1/1 saydam hücreli karsinom, 0/1 malign germ hücreli tümör ve 0/1 müsinöz kistadenokarsinom dahil), 1/4 karaciğer tümörünü (1/1
metastatik karsinom, 0/2 hepatoselüler karsinom ve 0/1 kolanjiyokarsinom dahil), 3/3 tiroid papiller karsinomunu, 2/2 meme infiltran
duktal karsinomunu, 2/2 bilinmeyen kökenli metastatik tümörü, 1/2 böbrek renal hücreli karsinomunu, 1/2 servikal skuamöz hücreli
karsinomu ve 1/1 timus atipik karsinoidini boyamıştır. Beyin tümörlerinde (0/2), özofagus tümörlerinde (0/2), mide tümörlerinde (0/2), dil
tümörlerinde (0/2), testis tümörlerinde (0/2), kolon tümörlerinde (0/2), rektum tümörlerinde (0/2), cilt tümörlerinde (0/2), yumuşak doku
tümörlerinde (0/2) ve bir larinks tümöründe (0/1) boyanma gözlenmemiştir. (Değerlendirilen toplam tümör vakası sayısı = 236).
NCL-L-bcl-2 normal ve neoplastik dokularda bcl-2 onkoprotein ekspresyonunun değerlendirilmesi için tavsiye edilir.
Genel Sınırlamalar
İmmünohistokimya uygun reagent'ların seçilmesinde; dokunun seçilmesi, fikse edilmesi ve işlenmesinde; IHC lamının hazırlanmasında
ve boyama sonuçlarının yorumlanmasında uzmanlık eğitimi gerektiren çok adımlı bir diagnostik işlemidir. Doku boyama, boyamadan
önce dokunun ele alınması ve işlenmesine bağlıdır. Diğer dokularla veya akışkanlarla hatalı fikse etme, dondurma, eritme, yıkama,
kurutma, ısıtma, seksiyonlama veya kontaminasyon artefakt, antikor trapping veya yanlış negatif sonuçlar oluşturabilir. Doku içerisinde
fikse etme ve gömme yöntemleri veya inherent aksaklıklar nedeniyle tutarsız sonuçlar ortaya çıkabilir.
4
Aşırı veya inkomplet karşıt boya, sonuçların doğru yorumlanmasına engel olabilir.
Herhangi bir boyamanın mevcut olması veya olmaması ile ilgili klinik yorumlama, uygun kontroller kullanılarak morfolojik çalışmalarla
tamamlanmalıdır ve hastanın klinik geçmişi ve diğer diagnostik testler kapsamında kalifiye bir patolojist tarafından değerlendirilmelidir.
Leica Biosystems Newcastle Ltd antikorları, belirtildiği gibi spesifik fikse etme işlemleri gerektiren dondurulmuş veya parafine
gömülmüş seksiyonlarda kullanılmak içindir. Özellikle neoplazmalarda beklenmedik antijen ekspresyonu ortaya çıkabilir. Boyanan doku
seksiyonunun klinik yorumu, morfolojik analiz ve uygun kontrollerin değerlendirmesini içermelidir.
BCL-2-L-CE
Page 36