Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 61

Nedodržanie predpísaných inkubačných dôb alebo teplôt môže viesť k nesprávnym výsledkom. Všetky takéto zmeny si vyžadujú
validáciu používateľom.
Kontrola kvality
Rozdiely v spracovaní tkaniva a technických postupoch v laboratóriu používateľa môžu viesť k významnému kolísaniu výsledkov, čo si
vyžaduje, okrem nasledujúcich postupov, aj pravidelné interné kontroly.
Kontroly by mali byť čerstvé pitevné/bioptické/chirurgické vzorky fixované čo najskôr formalínom a spracované zaliatím do parafínu
rovnakým spôsobom ako vzorky pacienta.
Pozitívna kontrola tkanivom
Identifikuje správne pripravené tkanivá a správne techniky zafarbenia.
Každá súprava testových podmienok v každom cykle zafarbenia musí obsahovať jednu pozitívnu kontrolu tkanivom.
Tkanivo so slabým pozitívnym farbením je pre optimálnu kontrolu kvality a na detekciu slabšej degradácie činidla vhodnejšie než tkanivo
so silným pozitívnym farbením.
2
Odporúčané tkanivo na pozitívnu kontrolu je tonzila
Ak pozitívna kontrola tkanivom nebude vykazovať pozitívne zafarbenie, výsledky testovaných vzoriek je nutné považovať za neplatné.
Negatívna kontrola tkanivom
Nutné vyšetriť po pozitívnej kontrole tkanivom s cieľom overiť špecificitu značenia cieľového antigénu primárnou protilátkou.
Odporúčané tkanivo na negatívnu kontrolu je mozoček.
Ako negatívnu kontrolu je možné použiť aj rôzne typy buniek prítomné vo väčšine tkanivových rezov, takýto postup si však vyžaduje
validáciu používateľom.
Prípadné nešpecifické farbenie má obvykle difúzny vzhľad. V rezoch tkanív silne fixovaných formalínom môže byť pozorované
sporadické farbenie spojiva. Na interpretáciu výsledkov farbenia používajte intaktné bunky. Nekrotické alebo degenerované bunky
sa často farbia nešpecificky. Falošne pozitívne výsledky môžu byť pozorované v dôsledku neimunologickej väzby proteínov alebo
3
produktov reakcie substrátu. Môžu byť spôsobené aj endogénnymi enzýmami, ako napr. pseudoperoxidázou (erytrocyty), endogénnou
peroxidázou (cytochróm C) alebo endogénnym biotínom (napr. pečeň, prsník, mozog, oblička) v závislosti od typu imunologického
farbenia. S cieľom diferencovať endogénnu enzymatickú aktivitu alebo nešpecifickú väzbu enzýmov od špecifickej imunoreaktivity
môžete nafarbiť ďalšie vzorky tkanív pacienta výhradne substrátovým chromogénom alebo enzymatickými komplexmi (avidín-biotín,
streptavidín, značený polymér), resp. substrátovým chromogénom. V prípade špecifického farbenia v negatívnej kontrole tkanivom je
nutné výsledky vzoriek pacienta považovať za neplatné.
Negatívna kontrola činidlom
Na vyhodnotenie nešpecifického zafarbenia použite nešpecifickú negatívnu kontrolu činidlom miesto primárnej protilátky s rezom
jednotlivých vzoriek pacienta, čo umožní lepšiu interpretáciu špecifického farbenia na mieste antigénu.
Tkanivo pacienta
Pacientske vzorky zafarbené prípravkom NCL-L-bcl-2 preskúmajte ako posledné. Intenzitu pozitívneho farbenia je nutné vyhodnotiť v
kontexte prípadného
nešpecifického zafarbenia negatívnej kontroly činidlom na pozadí. Podobne ako pri všetkých imunohistochemických testov znamená
negatívny výsledok, že antigén nebol detegovaný. Nepotvrdzuje jeho absenciu v testovaných bunkách/tkanivách. V prípade potreby
identifikujte falošne negatívne reakcie pomocou panelu protilátok.
Očakávané výsledky
Normálne tkanivá
Klon bcl-2/100/D5 zafarbil cytoplazmu a membránu lymfocytov v plášťových zónach a T-bunkových oblastiach sleziny, lymfatickej
uzliny, tonzily a týmusu. Zafarbenie bolo takisto pozorované v obličkových kanálikoch, bazálnych keratínocytoch, bazálnych epitelových
bunkách krčka maternice a vajíčkovodu, stromálnych fibroblastoch prsníkov a vaječníkov, bunkách hladkého svalstva myometria a
syncýciotrofoblastov v placente. (Celkový počet normálnych vyšetrených prípadov = 55).
Abnormálne tkanivá
Klon bcl-2/100/D5 zafarbil 88/113 difúznych veľkobunkových B-lymfómov, 8/26 Hodgkinových lymfómov, 13/15 folikulárnych lymfómov,
11/12 chronických lymfocytárnych lymfómov, 7/7 lymfómov z plášťových buniek, 3/6 T-bunkových anaplastických veľkobunkových
lymfómov, 4/4 angioimunoblastických T-bunkových lymfómov, 3/3 T-bunkových lymfómov, 3/3 T/NK lymfómov, 1/1 B-bunkového
akútneho lymfoblastického lymfómu, 1/1 primitívneho B/T-bunkového akútneho lymfoblastického lymfómu, 1/1 periférneho T-bunkového
lymfómu a 1/1 lymfómu okrajovej zóny, 2/4 nádorov pľúc (vrátane 1/1 nemalobunkového karcinómu, 1/1 adenokarcinómu, 0/1
skvamocelulárneho karcinómu a 0/1 veľkobunkového karcinómu), 2/4 nádorov vaječníkov (vrátane 1/1 serózneho cystadenokarcinómu,
1/1 karcinómu zo svetlých buniek, 0/1 malígneho nádoru zárodočných buniek a 0/1 mucinózneho cystadenokarcinómu), 1/4 nádorov
pečene (vrátane 1/1 metastatického karcinómu, 0/2 hepatocelulárnych karcinómov a 0/1 cholangiokarcinómu), 3/3 papilárnych
karcinómov štítnej žľazy, 2/2 infiltrujúcich duktálnych karcinómov prsníka, 2/2 metastatických nádorov neznámeho pôvodu, 1/2
karcinómov renálnych buniek obličiek, 1/2 cervikálnych skvamocelulárnych karcinómov a 1/1 atypického karcinoidu týmusu. Zafarbenie
nebolo pozorované pri nádoroch mozgu (0/2), nádoroch pažeráka (0/2), nádoroch žalúdka (0/2), nádoroch jazyka (0/2), nádoroch
semenníkov (0/2), nádoroch hrubého čreva (0/2), nádoroch konečníka (0/2), nádoroch kože (0/2), nádoroch mäkkých tkanív (0/2) a
nádore hrtana (0/1). (Celkový počet vyšetrených nádorov = 236).
NCL-L-bcl-2 sa odporúča na vyhodnotenie expresie onkoproteínu bcl-2 v normálnych a neoplastických tkanivách.
Všeobecné limitácie
Imunohistochémia je diagnostický postup pozostávajúci z viacerých krokov, ktorý si vyžaduje špecializované zaškolenie vo výbere
zodpovedajúcich činidiel, výbere tkanív, fixácie a spracovania, príprave IHC sklíčka a interpretácii výsledkov farbenia.
Farbenie tkaniva závisí od manipulácie s tkanivom a od jeho spracovania pred farbením. Nesprávna fixácia,
zmrazovanie,rozmrazovanie, premývanie, sušenie, ohrievanie, rezanie alebo kontaminácia inými tkanivami či tekutinami môžu viesť
k vzniku artefaktov, záchytu protilátok alebo falošne negatívnym výsledkom. Inkonzistentné výsledky môžu byť spôsobené zmenami
metód fixácie a montáže preparátov alebo inherentnými nepravidelnosťami v tkanive.
4
BCL-2-L-CE
Page 60