Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 43

Minimálisra kell csökkenteni a reagensek mikrobiális szennyeződését, különben megnövekedhet a nem specifikus festődés.
A megadottaktól eltérő inkubációs idők és hőmérsékletek hibás eredményekhez vezethetnek. A felhasználónak minden ilyen jellegű
változtatást validálnia kell.
Minőség-ellenőrzés
A felhasználó laboratóriumában alkalmazott szövetfeldolgozási és technikai eljárások eltérései jelentős különbséget okozhatnak az
eredményekben, ami az alábbi eljárásokon túl belső kontrollok rendszeres futtatását teszi szükségessé.
Kontrollként friss boncolási/biopsziás/sebészeti mintákat kell használni, amelyeket a lehető leghamarabb a betegmintákkal megegyező
módon kell formalinban fixálni, feldolgozni és paraffinviaszba ágyazni.
Pozitív szövetkontroll
A megfelelő szövet-előkészítés és festési technikák ellenőrzésére használatos.
Minden tesztelési körülményegyüttes esetében és minden megfestési sorozatban kell alkalmazni egy pozitív szövetkontrollt.
A gyengén pozitív festődésű szövet alkalmasabb az erősebben pozitív festődésű szövetnél az optimális minőség-ellenőrzéshez,
valamint a kismértékű reagensbomlás észleléséhez.
2
A javasolt pozitív kontrollszövet a tonsilla.
Ha a pozitív szövetkontroll nem mutat pozitív festődést, a vizsgált minták eredményeit érvénytelennek kell tekinteni.
Negatív szövetkontroll
A pozitív szövetkontroll után azért kell megvizsgálni, hogy a vizsgált antigén elsődleges antitest segítségével történő jelölésének
specificitását ellenőrizni lehessen.
A javasolt negatív kontrollszövet a kisagy.
Ezenkívül a legtöbb szövetmetszetben jelen lévő különböző sejttípusok gyakran használhatók negatív kontrollként, de ezeket a
felhasználónak kell ellenőriznie.
Ha van nem specifikus festődés, az rendszerint diffúz megjelenésű. A formalinban túlfixált szövetekből származó metszeteknél a
kötőszövet szórványos festődése is megfigyelhető. A festési eredmények értelmezésére ép sejteket használjon. A nekrotizált vagy
degenerálódott sejtek gyakran nem specifikusan festődnek meg. A fehérjék vagy a szubsztrát reakciótermékeinek nem immunológiai
3
kötődése miatt álpozitív eredmények jelentkezhetnek. Okozhatják ezt olyan endogén enzimek is, mint a pszeudoperoxidáz (eritrociták),
endogén peroxidáz (citokróm C), illetve endogén biotin (pl. máj, mell, agy, vese), az alkalmazott immunmegfestés típusától függően. Az
endogén enzim aktivitásának vagy az enzimek nem specifikus kötődésének a specifikus immunreakciótól való megkülönböztetésére
további betegszövetek festhetők kizárólag szubsztrát–kromogén oldattal vagy enzimkomplexekkel (avidin-biotin, sztreptavidin, jelölt
polimer) és szubsztrát–kromogénnel. Ha a negatív szövetkontroll specifikus festődést mutat, a betegminták eredményeit érvénytelennek
kell tekinteni.
Negatív reagenskontroll
A nem specifikus festődés kiértékeléséhez és az antigén helyén létrejövő specifikus festődés jobb értelmezéséhez minden betegminta
esetén egy metszeten alkalmazzon az elsődleges antitest helyett nem specifikus negatív reagenskontrollt.
Betegszövet
Az NCL-L-bcl-2 reagenssel festett betegmintákat vizsgálja meg utolsóként. A pozitív festődés intenzitását a negatív reagenskontroll
esetleges nem specifikus háttérfestődésének viszonylatában értékelje. Mint minden immunhisztokémiai vizsgálatnál, a negatív
eredmény azt jelenti, hogy az antigén nem volt kimutatható, nem pedig azt, hogy az antigén nem volt jelen a vizsgált sejtekben/
szövetben. Szükség esetén az álnegatív reakciók azonosítására használjon antitestpanelt.
Várható eredmények
Normál szövetek
A bcl-2/100/D5 klón megfestette a lép, a nyirokcsomók, a tonsilla és a csecsemőmirigy köpenyzónáiban és T-sejtes régióiban
elhelyezkedő limfociták citoplazmáját és membránját. Festődés volt megfigyelhető továbbá a vesetubulusokban, a bazális
keratinocitákban, a méhnyak és a petevezeték bazális hámsejtjeiben, az emlő és a petefészek stromális fibroblasztjaiban, a miometrium
simaizomsejtjeiben és a placenta szinciciotrofoblasztjaiban. (Vizsgált normál esetek összesített száma = 55).
Kóros szövetek
A bcl-2/100/D5 klón az alábbiakat festette meg: 88/113 diffúz nagy B-sejtes limfóma, 8/26 Hodgkin-limfóma, 13/15 follikuláris limfóma,
11/12 krónikus limfocitás limfóma, 7/7 köpenysejtes limfóma, 3/6 T-sejtes anaplasztikus nagysejtes limfóma, 4/4 angioimmunoblasztos
T-sejtes limfóma, 3/3 T-sejtes limfóma, 3/3 T/NK limfóma, 1/1 B-sejtes akut limfoblasztos limfóma, 1/1 primitív B-/T-sejtes akut
limfoblasztos limfóma, 1/1 perifériás T-sejtes limfóma, valamint 1/1 margináliszóna-limfóma, 2/4 tüdődaganat (részletezve:
1/1 nem kissejtes karcinóma, 1/1 adenokarcinóma, 0/1 laphámsejtes karcinóma és 0/1 nagysejtes karcinóma), 2/4 petefészek-
daganat (részletezve: 1/1 szerózus cisztadenokarcinóma, 1/1 világossejtes karcinóma, 0/1 malignus csírasejtes tumor és
0/1 mucinózus cisztadenokarcinóma), 1/4 májdaganat (részletezve: 1/1 metasztatikus karcinóma, 0/2 hepatocelluláris karcinóma és
0/1 kolangiokarcinóma), 3/3 papilláris pajzsmirigy-karcinóma, 2/2 infiltráló duktális emlőkarcinóma, 2/2 ismeretlen eredetű metasztatikus
daganat, 1/2 vesesejtes karcinóma, 1/2 laphámsejtes méhnyak-karcinóma és 1/1 csecsemőmirigy atípusos karcinoid. Nem volt festődés
megfigyelhető agydaganatok (0/2), nyelőcső-daganatok (0/2), gyomordaganatok (0/2), a nyelv daganatai (0/2), heredaganatok (0/2),
vastagbél-daganatok (0/2), végbél-daganatok (0/2), bőrdaganatok (0/2), lágyszövet-daganatok (0/2), valamint a gége daganata (0/1)
esetén. (Vizsgált tumoresetek összesített száma = 236.)
Az NCL-L-bcl-2 a bcl-2 onkoprotein expressziójának felmérésére ajánlott egészséges és daganatos szövetekben.
Általános korlátozások
Az immunhisztokémia több lépésből álló diagnosztikai folyamat, amely a következőket foglalja magában: speciális képzés alapján a
megfelelő reagensek kiválasztása; a szövetek kiválasztása, fixálása és feldolgozása; az IHC tárgylemez előkészítése; és a festési
eredmények értelmezése.
BCL-2-L-CE
Page 42