Table des Matières
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Eau distillée ou eau déionisée
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Contre-coloration au DAPI
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Leica HER2 FISH Control Slides (TA9123)
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BOND Aspirating Probe Cleaning System (CS9100)
B. Équipement requis mais non fourni
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Pipettes (permettant de mesurer des volumes de 1 à 20 µl, de 100 et 1000 µl)
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Lames chargées (BOND Plus Slides – S21.2113)
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BOND-MAX (21.0051) or BOND-III (21.2201)
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BOND Universal Covertiles
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BOND Mixing Stations (S21.1971)
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BOND Slide Label & Print Ribbon (S21.4564)
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Lamelles couvre-objet
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Étuve à air chaud (capable de maintenir une température de 60 °C)
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Microscope à fluorescence (objectif de 60–100x) avec source lumineuse appropriée.
Noter le nombre d'heures d'utilisation de l'ampoule et remplacer l'ampoule avant la durée
de vie prévue. Veiller au bon alignement de la lampe.
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Jeu de filtres de fluorescence approprié (SpectrumOrange
pic d'émission à 588 nm, SpectrumGreen
à 524 nm et DAPI – pic d'excitation à 367 nm, pic d'émission à 452 nm). Des jeux de
filtres pour microscope à fluorescence multi-passe-bande optimisés pour l'utilisation avec
le Leica HER2 FISH System - 30 Test sont disponibles pour la plupart des modèles de
microscopes. Les jeux de filtres recommandés pour le Leica HER2 FISH System - 30
Test sont le double passe-bande DAPI/9-Orange, le double passe-bande DAPI/Vert, le
double passe-bande Vert/Orange(V.2) et le triple passe-bande DAPI/Vert/Orange (V.2).
C. Méthodologie
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Pour pouvoir suivre cette méthodologie, les utilisateurs doivent être correctement
formés à la technique de fluorescence in situ automatisée.
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Chaque coupe de l'essai colorée avec LSI HER2/CEP17 Dual Probe permet la même
analyse cellulaire des signaux HER2 et centromériques du chromosome 17. Un rapport
ultérieur de signaux de HER2 par rapport à ceux du chromosome 17 permettra d'attribuer
une valeur quantitative à l'échantillon, indiquant un résultat négatif (non-amplifié) ou
positif (amplifié). Les résultats équivoques (limite), compris entre 1,8 et 2,2, doivent être
interprétés avec prudence. Compter 20 noyaux additionnels et recalculer le rapport.
D. Prétraitement enzymatique BOND
Avant la coloration, diluer le BOND Enzyme Concentrate 2 fourni avec une dilution au 1/300
en utilisant le BOND Enzyme Diluent fourni dans l'un des BOND Open Containers fournis.
Par exemple : pour colorer 10 lames, préparer 3 ml de solution enzymatique de travail en
diluant 10 µl de BOND Enzyme Concentrate 2 dans 2 990 µl de BOND Enzyme Diluent. Il
est recommandé de préparer l'enzyme peu de temps avant chaque cycle de coloration et
d'utiliser un volume minimum de 900 µl par cycle.
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(S21.2001, S21.4583 ou S21.4611)
™
– pic d'excitation à 497 nm, pic d'émission
™
Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 EU-FR-CE-Rev_F 17/07/2015
– pic d'excitation à 559 nm,
™
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