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E. Protocole de coloration par défaut
Il est recommandé d'utiliser le Leica HER2 FISH System - 30 Test avec le protocole de
coloration par défaut recommandé qui figure dans le Tableau 2 ci-dessous.
Type de protocole
Coloration
Préparation
HIER
Enzyme
Dénaturation
Hybridation
Tableau 2 : Leica HER2 FISH System - 30 Test Staining Protocol par défaut
F. Étapes de la procédure
Ces instructions doivent être lues conjointement avec le mode d'emploi du BOND-MAX
and BOND-III System. Utiliser pour chaque lame un nouveau BOND Universal Covertile.
L'emploi de BOND Universal Covertiles utilisés auparavant soit pour la coloration
immunohistochimique soit pour l'hybridation in-situ n'a pas été validé avec ce test.
1. Sur le BOND-MAX and BOND-III System, vérifier que les conteneurs pour vrac et
déchets dangereux ont suffisamment de capacité pour réaliser les processus de
coloration requis.
2. Vérifier que les conteneurs de réactifs en vrac contiennent l'alcool adéquat, l'eau distillée
ou déionisée appropriée, la BOND Dewax Solution, la BOND Epitope Retrieval Solution
1 et la BOND Wash Solution pour l'exécution des cycles de coloration requis.
3. Vérifier que la BOND Mixing Station installée est propre.
4. Mettre en marche le BOND-MAX and BOND-III System.
5. Mettre en marche le PC connecté au BOND-MAX and BOND-III System.
6. Ouvrir le logiciel BOND.
7. Dans le cas d'un nouveau kit Leica HER2 FISH System - 30 Test, scanner le code-barres
du plateau de réactifs avec le scanner à main pour entrer le système dans l'inventaire de
réactifs BOND (code-barres unique seulement).
8. Préparer BOND Enzyme 5 dans le BOND Open Container fourni à une dilution de 1/300.
Par exemple, pour 10 lames, ajouter 10 µl de BOND Enzyme Concentrate 2 à 2 990 µl
de BOND Enzyme Diluent.
9. Scanner le BOND Open Container fourni et enregistrer comme Bond Enzyme 5.
10. Accéder à l'écran de configuration de la lame, puis cliquer sur Ajouter un cas.
11. Entrer les données du premier cas. Vérifier que le volume de distribution est réglé à
150 µL et que le protocole de préparation est *Dewax. Cliquer sur OK.
12. Une fois le cas mis en évidence sur l'écran de configuration de la lame, cliquer sur
Ajouter lame.
13. Commencer par ajouter les lames test des patients. Vérifier que le type de tissu est réglé
sur Tissu de test.
14. Sélectionner le mode de coloration Simple.
15. Sélectionner le processus ISH.
16. Sélectionner *LSI HER2/CEP17 Dual Probe – 30 Test dans la liste de sondes. L'onglet
Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 EU-FR-CE-Rev_F 17/07/2015
Nom du protocole
*FISH Protocol A
*Dewax
*HIER 25 min with ER1 (97)
*Enzyme 5 for 25 min
*D10
*ISH Hybridization (12Hr)
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