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Protocoles se positionne par défaut sur le protocole de coloration correct (*FISH Protocol
A), le protocole HIER (*HIER 25 min with ER1 (97)), le protocole EIER (*Enzyme 5 for 25
min), la dénaturation (*D10) et l'hybridation (*ISH Hybridization (12Hr)).
17. Répéter les étapes 10 à 16 jusqu'à la création complète des lames test des patients et
des contrôles (lames de contrôle Leica HER2 FISH et/ou contrôles internes). Imprimer
les étiquettes des lames.
18. Étiqueter correctement les lames.
19. Ouvrir les couvercles de tous les conteneurs du Leica HER2 FISH System - 30 Test, puis
charger le plateau de réactifs sur le BOND-MAX and BOND-III System.
20. Appliquer un nouveau Covertile sur chaque lame.
21. Charger le plateau porte-lames sur le BOND-MAX and BOND-III System, puis appuyer
sur le bouton chargement/déchargement.
22. Confirmer que les lames ont été scannées, puis cliquer sur le bouton Run (Play) sur
l'écran du statut du système pour lancer immédiatement le cycle (pour le Leica HER2
FISH System - 30 Test, il est recommandé d'exécuter l'analyse pendant la nuit en
utilisant la fonction de départ retardé).
23. Vérifier que le champ d'indication du plateau affiche Trait. (OK) et que le numéro de lot
et l'heure de finition sont affichés.
24. Quand le processus est terminé, appuyer sur le bouton chargement/déchargement et
extraire le plateau porte-lames du BOND-MAX and BOND-III System.
25. Retirer les Covertiles, puis rincer les lames dans de l'eau déionisée.
26. Déshydrater rapidement en utilisant deux fois en alternance alcool et air sec.
27. Appliquer 20 µl de DAPI directement sur l'échantillon.
28. Poser le couvre-lame et laisser la solution se répandre complètement, en veillant à
éliminer les bulles d'air.
29. Sceller le bord du couvre-lame avec du vernis à ongles ou un agent de scellement similaire.
30. Placer les lames dans l'obscurité afin de faciliter le développement du signal avant
l'observation au microscope à fluorescence.
31. Pour préserver l'intensité du signal, stocker les lames colorées à -20 °C.
G. Stockage des lames
Stocker les lames colorées à -20 °C dans l'obscurité. Après avoir sorti les lames de leur lieu
de stockage à -20 °C, attendre qu'elles soient à température ambiante avant de les observer
au microscope.
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Leica Biosystems Mode d'emploi du Leica HER2 FISH System - 30 Test TA9217 EU-FR-CE-Rev_F 17/07/2015
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