Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 58

Kontrola jakosti
Rozdíly ve zpracování tkání a v technických postupech v laboratoři uživatele mohou způsobit významnou variabilitu výsledků, což
vyžaduje kromě níže uvedených postupů i pravidelné provádění kontrol v laboratoři.
Kontroly musí být čerstvé pitevní/bioptické/operační vzorky co nejdříve fixované formalínem, zpracované a zalité do parafínového vosku,
stejným způsobem jako vzorek/vzorky pacienta.
Pozitivní tkáňová kontrola
Používá se k průkazu správně připravených tkání a správných barvicích technik.
V každém barvicím cyklu musí být použita jedna pozitivní tkáňová kontrola pro každý soubor testovacích podmínek.
Pro optimální kontrolu jakosti a k detekci menšího stupně degradace reagencie je vhodnější tkáň se slabým pozitivním barvením než
tkáň se silným pozitivním barvením.
Doporučená pozitivní tkáňová kontrola je kůže.
Pokud pozitivní tkáňová kontrola nevykazuje pozitivní barvení, musí být výsledky testovaných vzorků považovány za neplatné.
Negativní tkáňová kontrola
Musí být vyšetřena po pozitivní tkáňové kontrole k ověření specificity označení cílového antigenu primární protilátkou.
Doporučená negativní tkáňová kontrola je mozeček.
Alternativně často představuje místa negativní kontroly řada různých typů buněk přítomných ve většině tkáňových řezů, to ale musí
uživatel validovat.
Nespecifické barvení, je-li přítomno, má obvykle difúzní vzhled. V řezech ze tkání nadměrně fixovaných formalínem může být také
zjištěno sporadické barvení pojivové tkáně. K interpretaci výsledků barvení použijte neporušené buňky. Nekrotické nebo degenerované
buňky se často barví nespecificky.
reakčního substrátu. Mohou být také způsobeny endogenními enzymy, jako je např. pseudoperoxidáza (erytrocyty), endogenní
peroxidáza (cytochrom C) nebo endogenní biotin (např. játra, prs, mozek, ledviny), podle typu použitého imunobarviva. K odlišení aktivity
endogenních enzymů či nespecifické vazby enzymů od specifické imunoreaktivity mohou být barveny další tkáně pacienta výlučně
chromogenním substrátem, případně enzymovými komplexy (avidin-biotin, streptavidin, značený polymer) a chromogenním substrátem.
Pokud dojde v negativní tkáňové kontrole ke specifickému barvení, musí být výsledky vzorků pacienta považovány za neplatné.
Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení v místě antigenu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta nespecifickou negativní reagenční kontrolu místo primární protilátky.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí NCL-L-5D3. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu se vším
nespecifickým barvením pozadí u negativní reagenční kontroly. Jako u každého imunohistochemického vyšetření, negativní výsledek
znamená, že antigen nebyl zjištěn, nikoli, že antigen není ve vyšetřovaných buňkách/tkáních přítomen. V případě potřeby použijte k
identifikaci falešně negativních reakcí panel protilátek.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Klon 5D3 detekoval cytokeratiny 8 a 18 v cytoplazmě všech jednoduchých žlázových a přechodných epitelů. Normální stratifikovaný
dlaždicový epitel z různých lokalit nevykazoval žádné barvení, vyjma vrstvy bazálních buněk a variety non-epiteliálních tkání (celkový
počet hodnocených normálních tkání = 158).
Abnormální tkáně
Klon 5D3 zbarvil 25/33 adenokarcinomů tlustého střeva, 2/3 dlaždicobuněčných karcinomů jícnu, 3/3 adenokarcinomů žaludku,
2/3 adenokarcinomů plic, 2/3 adenokarcinomů slinivky, 3/3 nediferencovaných urotheliálních karcinomů močového měchýře,
1/2 papilárních karcinomů štítné žlázy, 3/3 invazivních duktálních karcinomů prsu, 2/3 dlaždicobuněčných karcinomů děložního čípku,
2/2 adenokarcinomů prostaty a 5/5 adenokarcinomů močového měchýře. Barvení nebylo pozorováno u 0/3 astrocytomů a 0/3 renálních
světlobuněčných karcinomů (celkový počet hodnocených abnormálních případů = 69).
Produkt NCL-L-5D3 se doporučuje použít k detekci lidských proteinů cytokeratin 8 a 18 v normálních a
neoplastických tkáních jako doplněk ke konvenční histopatologii s použitím neimunologických histochemických
nátěrů.
Obecná omezení
Imunohistochemické vyšetření je vícekrokový diagnostický proces, který spočívá ve specializovaném školení ve výběru vhodných
reagencií; výběru, fixaci a zpracování tkání; přípravě imunohistochemickího sklíčka; a v interpretaci výsledků barvení.
Barvení tkáně závisí na manipulaci s tkání a jejím zpracování před barvením. Nesprávným postupem při fixaci, zmrazení, rozmrazení,
omývání, sušení, zahřívání, krájení řezů nebo kontaminací jinými tkáněmi či tekutinami mohou vzniknout artefakty, může dojít k
vychytávání protilátek nebo k falešně negativním výsledkům. Nekonzistentní výsledky mohou být důsledkem odchylek ve fixačních
metodách a metodách zalití v konzervačním médiu nebo přirozených odchylek ve tkáni.
Nadměrné nebo nedostatečné kontrastní barvení může narušit správnou interpretaci výsledků.
Klinickou interpretaci jakéhokoliv barvení nebo jeho nepřítomnosti je nutné doplnit morfologickým vyšetřením s použitím správných
kontrol a zhodnotit je musí kvalifikovaný patolog v kontextu s klinickou anamnézou pacienta a jinými diagnostickými testy.
Protilátky společnosti Leica Biosystems Newcastle Ltd se používají, jak bylo uvedeno, u zmrazených nebo u parafínových řezů se
specifickými požadavky na fixaci. Může dojít k expresi neočekávaných antigenů, zejména u nádorů. Klinická interpretace jakéhokoli
barveného tkáňového řezu musí zahrnovat morfologickou analýzu a zhodnocení příslušných kontrol.
5D3-L-CE
Page 57
2
Falešně pozitivní výsledky mohou být důsledkem neimunologické vazby proteinů nebo produktů
3
4