Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 37

Kalite Kontrol
Kullanıcının laboratuvarında doku işleme ve teknik işlemlerdeki farklar sonuçlarda önemli değişkenliğe neden olabilir ve aşağıdaki
işlemlere ek olarak düzenli şekilde tesis içi kontrollerin kullanılmasını gerektirir.
Kontroller, hasta numunesi/numuneleriyle aynı şekilde mümkün olduğunca kısa süre içinde formalin fiksasyonlu, işlenmiş ve parafine
gömülü taze otopsi/biyopsi/cerrahi materyal olmalıdır.
Pozitif Doku Kontrolü
Doğru hazırlanmış dokuları ve uygun boyama tekniklerini belirtmek için kullanılır.
Her boyama döngüsünde her test koşulu setine bir pozitif doku kontrolü dahil edilmelidir.
Zayıf pozitif boyama yapılmış doku, optimal kalite kontrolü ve minör reaktif bozunma düzeylerini saptamak için güçlü pozitif boyama
yapılmış dokudan daha uygundur.
Önerilen pozitif kontrol dokusu deridir.
Eğer pozitif doku kontrolü pozitif boyanma göstermezse, test numunelerinin sonuçları geçersiz kabul edilmelidir.
Negatif Doku Kontrolü
Primer antikor tarafından hedef antijenin etiketlenmesinin spesifikliğini doğrulamak için, pozitif doku kontrolünden sonra incelenmelidir.
Önerilen negatif kontrol dokusu serebellumdur.
Alternatif olarak çoğu doku kesitinde bulunan farklı hücre tiplerinin çeşitliliği sıklıkla negatif kontrol bölgeleri sunar ama bu durum
kullanıcı tarafından doğrulanmalıdır.
Eğer varsa nonspesifik boyanmanın görünümü genellikle difüzdür. Aşırı formalin fiksasyonlu dokulardan kesitlerde bağ dokusunun
sporadik boyanması da görülebilir. Boyanma sonuçlarının yorumlanması için sağlam hücreler kullanın. Nekrotik ve dejenere hücreler
genellikle spesifik olmayan şekilde boyanır.
yanlış pozitif sonuçlar görülebilir. Bu sonuçlar ayrıca, kullanılan immün-boyaya bağlı olarak psödoperoksidaz (eritrositler), endojen
peroksidaz (sitokrom C) veya endojen biotin (örn. karaciğer, meme, beyin, böbrek) gibi endojen enzimlerden de kaynaklanabilir. Endojen
enzim aktivitesini veya nonspesifik enzim bağlanmasını spesifik immünoreaktiviteden ayırmak için ek hasta dokuları sırasıyla sadece
substrat kromojen veya enzim kompleksleri (avidin-biotin, streptavidin, etiketli polimer) ve substrat kromojen ile boyanabilir. Negatif doku
kontrolünde spesifik boyanma oluşursa hasta numunelerinin sonuçları geçersiz kabul edilmelidir.
Negatif Reaktif Kontrolü
Spesifik olmayan boyamayı değerlendirmek ve antijen bölgesinde spesifik boyanmayı daha iyi yorumlayabilmek için her hasta örneği
kesitinde primer antikor yerine spesifik olmayan bir negatif reaktif kontrolü kullanın.
Hasta Dokusu
NCL-L-5D3 ile boyanmış hasta numunelerini en son inceleyin. Pozitif boyama yoğunluğu, negatif reaktif kontrolünün spesifik olmayan
herhangi bir arka plan boyaması bağlamında değerlendirilmelidir. Her immünohistokimyasal testle olduğu gibi negatif bir sonuç
antijenin saptanmadığı anlamına gelir ve antijenin çalışılan hücrelerde/dokuda bulunmadığı anlamına gelmez. Gerekirse yalancı negatif
reaksiyonları tanımlamak için bir antikor paneli kullanın.
Öngörülen Sonuçlar
Normal Dokular
Klon 5D3, tüm basit glandüler ve transisyonel epitelyumdaki sitoplazmdaki sitokeratin 8 ve 18'i tespit etti. Bazal hücre katmanı ve çeşitli
epiteliel olmayan dokular dışında çeşitli alanlardaki normal tabakalı skuamoz epitelde boyama görülmedi (Değerlendirilen toplam normal
doku sayısı = 158).
Anormal Dokular
Klon 5D3, 25/33 kolon adenokarsinumunu, 2/3 özofagus skuamoz hücreli karsinomu, 3/3 mide adenokarsinomunu, 2/3 akciğer
adenokarsinomunu, 2/3 pankreas adenokarsinomunu, 3/3 idrar torbası düşük derece ürotelial karsinomunu, 1/2 tiroid papiler
karsonumunu, 3/3 meme invazif kanal karsinomunu, 2/3 serviks skuamoz hücreli karsinomu, 2/2 prostat adenokarsinomunu ve 5/5 idrar
torbası adenokarsinomunu boyadı. 0/3 astrositomda ve 0/3 renal berrak hücreli karsinomlarında boyama görülmemiştir (Değerlendirilen
toplam anormal vaka sayısı = 69).
NCL-L-5D3, immünolojik olmayan histokimyasal boyamalar kullanılarak yapılan geleneksel histopatolojiye ek olarak
normal ve neoplastik dokularda insan sitokeratin 8 ve 18 proteinin saptanması için önerilir.
Genel Sınırlamalar
İmmünohistokimya; uygun reaktiflerin seçimi, doku seçimi, fiksasyonu ve işlenmesi, IHC slaytının hazırlanması ve boyama sonuçlarının
yorumlanması alanlarında özel eğitimden oluşan, çok adımlı bir diagnostik süreçtir.
Doku boyama, boyama öncesinde dokunun kullanımına ve işlenmesine bağlıdır. Uygun olmayan fiksasyon, dondurma, çözme, yıkama,
kurutma, ısıtma, kesit alma veya diğer dokular veya sıvılarla kontaminasyon artefaktlara, antikor tutulmasına veya yalancı negatif
sonuçlara yol açabilir. Tutarsız sonuçlar, fiksasyon ve gömme yöntemlerindeki değişikliklerden ya da dokunun yapısından kaynaklanan
düzensizliklerden kaynaklanabilir.
Aşırı ya da tam olmayan karşıt boyama, sonuçların düzgün yorumlanmasını olumsuz etkileyebilir.
Herhangi bir boyanmanın veya yokluğunun klinik yorumlaması hastanın klinik öyküsü ve diğer tanısal testler bağlamında nitelikli bir
patoloji uzmanı tarafından değerlendirilmeli ve uygun kontroller kullanılarak morfolojik çalışmalarla desteklenmelidir.
Leica Biosystems Newcastle Ltd'in antikorları, belirtilen şekilde, özel fiksasyon gereklilikleriyle parafine gömülü veya dondurulmuş
kesitler üzerinde kullanılır. Özellikle neoplazmlarda beklenmeyen antijen ekspresyonu oluşabilir. Herhangi bir boyanmış doku kesitinin
klinik yorumu morfolojik analizi ve uygun kontrollerin değerlendirilmesini içermelidir.
5D3-L-CE
Page 36
2
Proteinlerin veya substrat reaksiyon ürünlerinin immünolojik olmayan bağlanması nedeniyle
3
4