Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 49

По вопросам утилизации любых возможно токсических компонентов выполняйте требования федеральных, региональных или
местных нормативных документов.
С образцами (до и после фиксации) и всеми материалами, которые находятся под их воздействием, следует обращаться как со
способными к передаче инфекции и утилизировать, соблюдая соответствующие меры предосторожности.
реактивы в пипетку ртом и не допускайте контакта реактивов и образцов с кожей и слизистыми оболочками. В случае контакта
реактивов или образцов с чувствительными зонами промойте их большим количеством воды. Обратитесь за медицинской
помощью.
Сводите к минимуму микробное загрязнение реактивов во избежание усиления неспецифического окрашивания.
Инкубация при сроках и температурах, отличных от указанных в инструкции, может дать ошибочные результаты. Любые
подобные изменения должны быть валидированы пользователем.
Контроль качества
Различия в методах обработки тканей и технических процедурах, выполняемых в лаборатории пользователя, могут привести к
существенной вариабельности результатов, в связи с чем требуется регулярное выполнение внутрилабораторных контролей в
дополнение к указанным ниже процедурам.
В качестве контролей следует использовать свежие образцы, полученные при аутопсии, биопсии или хирургических процедурах,
фиксированные в формалине, обработанные и как можно скорее залитые в парафин так же, как были обработаны полученные
у пациентов образцы.
Положительный контроль ткани
Применяется для проверки правильности подготовки тканей и методов окрашивания.
В каждый набор условий теста при каждом цикле окрашивания следует включать один срез ткани для положительного контроля.
Для оптимального контроля качества и обнаружения незначительных уровней деградации реактива более подходит ткань со
слабым положительным окрашиванием, чем ткань с сильным положительным окрашиванием.
Кожа является тканью, которую рекомендуется использовать в качестве положительного контроля.
При отсутствии положительного окрашивания ткани, использующейся в качестве положительного контроля, результаты,
полученные с исследуемыми образцами, считаются недействительными.
Отрицательный контроль ткани
Этот тест необходимо выполнять после положительного контроля ткани для проверки специфичности мечения целевого
антигена первичным антителом.
В качестве отрицательного контроля рекомендуется ткань мозжечка.
Кроме того, разнообразные типы клеток для отрицательного контроля можно часто найти в большинстве срезов тканей, однако
такие препараты должны быть проверены пользователем.
Неспецифическое окрашивание, если оно присутствует, обычно выглядит диффузным. В срезах тканей, избыточно
фиксированных формалином, можно также иногда увидеть окрашивание соединительной ткани. Для интерпретации
результатов окрашивания используйте интактные клетки. Некротизированные или разрушенные клетки часто окрашиваются
неспецифически. Неиммунное связывание белков или продуктов реакции с субстратом может привести к ложноположительным
3
результатам. Такие же результаты могут быть связаны с эндогенными ферментами, например псевдопероксидазой (в
эритроцитах), эндогенной пероксидазой (цитохром C) или эндогенным биотином (например, в печени, молочной железе,
головном мозге или почке) в зависимости от типа использованного иммунного окрашивания. Чтобы отличить активность
эндогенных ферментов или неспецифическое связывание ферментов от специфической иммунореактивности, можно
выполнить окрашивание дополнительных тканей пациента исключительно хромогенным субстратом или ферментными
комплексами (авидин-биотин, стрептавидин, меченый полимер) и хромогенным субстратом соответственно. При наличии
специфического окрашивания в отрицательном контроле ткани результаты исследования полученных у пациентов образцов
считаются недействительными.
Отрицательный контроль реактива
Для оценки неспецифического окрашивания и лучшей интерпретации специфического окрашивания в области связывания
антигена, исследуя срезы каждого образца, взятого у пациента, вместо первичных антител используйте реактив, служащий в
качестве неспецифического отрицательного контроля.
Ткань, полученная у пациента
Исследуйте образцы взятой у пациента ткани, которые окрашены с помощью NCL-L-5D3, в последнюю очередь. Интенсивность
положительного окрашивания следует оценивать с учетом любого неспецифического фонового окрашивания отрицательного
контроля реактива. Как и при любом иммуногистохимическом исследовании, отрицательный результат означает необнаружение
антигена, но не его отсутствие в исследованных клетках или ткани. При необходимости следует использовать панель антител
для выявления ложноотрицательных реакций.
Ожидаемые результаты
Нормальные ткани
Клон 5D3 обнаружил цитокератины 8 и 18 в цитоплазме любого простого железистого или переходного эпителия. Окрашивание
не обнаружено в нормальном многослойном плоском эпителии из разных мест, кроме слоя базальных клеток, и различных
неэпителиальных тканей (общее число образцов исследованных нормальных тканей = 158).
Патологически измененные ткани
Клон 5D3 окрасил 25/33 случаев аденокарциномы толстого кишечника, 2/3 случаев плоскоклеточной карциномы пищевода, 3/3
случаев аденокарциномы желудка, 2/3 случаев аденокарциномы легкого, 2/3 случаев аденокарциномы поджелудочной железы,
3/3 случаев уротелиальной карциномы мочевого пузыря низкого уровня, 1/2 случаев папиллярной карциномы щитовидной
железы, 3/3 случаев инвазивной карциномы протоков молочной железы, 2/3 случаев плоскоклеточной карциномы шейки матки,
2/2 случаев аденокарциномы простаты и 5/5 случаев аденокарциномы мочевого пузыря. Окрашивание не наблюдалось в
0/3 случаев астроцитомы и 0/3 случаев светлоклеточной почечной карциномы (общее число исследованных патологически
измененных образцов= 69).
5D3-L-CE
Page 48
Никогда не набирайте
1
2